锌诱导的金属硫蛋白对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护

摘要

第一部分：大鼠肝移植模型的构建 目的：寻找并建立一种稳定的大鼠肝移植模型。 方法：采用改良二袖套法吻合血管，在供肝的灌注、取肝、肝上下腔静脉的吻合、围手术期处理等方面进行改进，共施行大鼠原位肝移植实验100例，观察术后并发症及存活率。 结果：经过100例次的训练，建立了稳定的大鼠肝移植模型，手术成功率94％，两周存活率90％，无肝期15.4±2.0分钟，受体手术时间45.4±5.0分钟。 结论：改良二袖套法大鼠肝移植术具有远期生存率高，并发症少的优点，是一种可靠稳定的大鼠肝移植模型。 第二部分：锌诱导的金属硫蛋白对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护作用 目的：探讨锌诱导大鼠肝脏产生金属硫蛋白，并对移植肝缺血再灌注损伤起保护作用的机制。 方法：雄性SD大鼠200～250克，共24只，配成12对，受体略重于供体，随机分成2组：实验组和对照组。术前连续3天给供体大鼠腹腔注射5mg/kg ZnSO<,4>·7H<,2>O，最后一次于缺血前12小时给予；对照组则用不含ZnSO<,4>·7H<,2>O同等剂量的生理盐水同时间腹腔注射。然后使用改良二袖套法行大鼠原位肝移植术。门静脉复流六小时后，进腹观测两组供肝胆汁分泌情况，检测血清中AST、ALT、LDH水平，取肝脏组织，电镜下观察肝组织的超微结构，流式细胞仪分析肝细胞的凋亡百分比，TUNEL法检测肝细胞的凋亡情况，免疫组化法检测TNF-α的表达，同时检测两组肝脏中硫蛋白的含量，测定NO、T-AOC、MDA的含量。对实验结果所采集数据采用均数±标准差，应用成组t检验法，采用统计软件SPSS 11.5进行统计分析。 结果：实验组胆汁分泌量显著多于对照组，而AST、ALT、LDH水平显著低于对照组。实验组肝脏中硫蛋白量明显高于对照组肝脏中硫蛋白的含量。HE染色实验组肝细胞损伤显著轻于对照组。流式细胞仪分析实验组凋亡百分比显著低于对照组。TUNEL法检测显示实验组凋亡显著少于对照组。免疫组化显示对照组TNF-α免疫组化染色阳性明显多于实验组，同时实验组MT、NO、T-AOC含量明显高于对照组，MDA的含量明显低于对照组。 结论：锌对大鼠肝移植模型缺血再灌注损伤具有较强的保护作用，其机制之一可能是通过诱导肝脏金属硫蛋白的产生，从而在清除自由基抗氧化、保护细胞膜、抑制细胞凋亡等方面对移植肝的缺血再灌注发挥保护作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要缩略词表

声明

前言

第一部分大鼠肝移植模型的构建

动物及器材

实验方法

附图

结果

讨论

参考文献

第二部分锌诱导的金属硫蛋白对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的保护

材料与方法

结果

附图

讨论

结论

参考文献

综述金属硫蛋白与缺血再灌注损伤

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