自噬在重组人血管内皮抑制素与厄洛替尼对A549细胞体外抑制中的作用研究

摘要

目的：通过观察重组人血管内皮抑制素(Rh-endostatin/Endostar/YH-16，恩度)、厄洛替尼(Erlotinib，Tarceva)以不同浓度单药及联合处理人肺腺癌细胞株A549后抑制细胞增殖及诱导自噬的效果，探讨自噬在抑瘤过程中的作用机制，从而为NSCLC的治疗提供新的思路。
　　 方法：以人肺腺癌细胞株A549为研究对象，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼三种不同处理后对A549细胞增殖抑制的影响并计算半数抑制浓度(IC50)、联合指数(CI)。透射电子显微镜下观察自噬体等超微结构的形态学改变。用Western blot法检测各组自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ表达的差异。应用流式细胞术检测上述不同处理组对A549细胞周期的影响及细胞凋亡率的变化。
　　 结果：(1)经重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼三种处理后均可抑制A549细胞增殖，作用呈浓度依赖性，随药物浓度的增加，其抑制率增加(P<0.05)；重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼对A549细胞可产生协同作用，CI<1。(2)透射电镜下观察重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组A549细胞自噬体数目较对照组增多，且两药联合组自噬体数目较单药组数量增多。(3)重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组随药物浓度增加处理后均可使A549细胞LC3-Ⅱ蛋白表达增多(P<0.05)，与对照组相比差别亦有显著统计学意义(P<0.05)；重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组LC3-Ⅱ蛋白表达较对应浓度药物单独作用时明显增加(P<0.05)。(4)重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组均可引起细胞周期改变，重组人血管内皮抑制素组主要使G0/G1期细胞所占比例增加，处于S期细胞比例减少，与对照组相比差别有显著统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，厄洛替尼主要使G0/G1期细胞所占比例增加，处于G2/M期细胞所占比例减少(P<0.05)。与对照组及药物单用时相比，重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组G0/G1期细胞所占比例显著增多，S期细胞所占比例明显减少(P<0.05)。(5)与对照组相比，重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组均可引起A549细胞凋亡率增加(P<0.05)；重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组细胞凋亡率较药物单用时显著增多(P<0.05)。
　　 结论：重组人血管内皮抑制素与厄洛替尼单独及联合作用均可抑制A549细胞的增殖，可诱导肺腺癌A549细胞的自噬，两种不同作用机制的靶向治疗药物具有协同作用，可能与激活自噬信号传导途径有关。此外，并可诱导细胞凋亡和影响细胞周期。