MDS患者骨髓异常克隆细胞起源的初步研究

摘要

目的：探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓异常克隆细胞的起源，即MDS患者骨髓CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞中是否存在恶性克隆细胞及恶性克隆所占的比例；并研究CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞长期培养形成集落的情况。
　　 方法：1、用免疫磁珠分选技术(MACS)分选11例染色体异常的MDS患者(其中单一8号染色体三体4例，含有8号染色体三体的复杂核型2例，单一5q-2例，含有5q-的复杂核型2例，5q-合并8号染色体三体1例)的骨髓单个核细胞(BMNC)中的CD34+CD38-细胞和CD34+CD38+细胞，分别制成涂片；将上述11例患者的骨髓液溶血得到骨髓有核细胞并甩片备FISH。然后在上述涂片上通过荧光原位杂交(FISH)方法比较CD34+CD38-、CD34+CD38+和骨髓有核细胞这三群细胞中异常克隆细胞的百分比。2、对其中2例8三体患者的CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞分别长期培养(LTC)6周后，接种到甲基纤维素完全培养基中进行分化培养，14天后观察是否有细胞集落形成。如果有集落形成则分析集落的克隆来源。
　　 结果：1、这两群细胞在5q-和8号染色体三体的MDS患者中均有恶性克隆的累及，但是CD34+CD38-干细胞中恶性克隆细胞的比例(46.3±8.1)％低于CD34+CD38+祖细胞中的恶性克隆细胞比例(75.9±6.8)％，p<0.001；恶性克隆比例在CD34+CD38+祖细胞与骨髓有核细胞之间没有明显差异，p=0.833。2、2例8三体患者来源的CD34+CD38-造血干细胞和CD34+CD38+祖细胞体外长期培养未见集落形成。
　　 结论：1、本研究结果提示MDS患者中5q-和8三体异常克隆均可能起源于造血干细胞阶段，而在祖细胞阶段异常克隆占据造血优势。2、推测恶性克隆细胞在晚期分化阶段凋亡增加。