Cu2+印迹戊二醛交联羧甲基壳低聚糖防治铀中毒及作用机制的研究

摘要

目的：研究Cu2+印迹戊二醛交联羧甲基壳低聚糖（Cu-Glu-CMC）对贫铀（DU）导致的MC3T3-E1细胞中毒的防护作用，并初步探讨其保护机制。
　　方法：采用ICP-MS法检测Cu-Glu-CMC对铀的螯合饱和容量；EPR、ABTS、FRAP等方法检测Cu-Glu-CMC的体外抗氧化活性；DU染毒细胞前30min分别加入50,100,200mg·L-1Cu-Glu-CMC，MTT法检测细胞活力，ICP-MS法检测细胞内DU蓄积水平；电镜观察细胞超微结构；流式细胞仪、DCF荧光染色、MDA和SOD等检测细胞内氧化应激水平；ELISA法和免疫组织化学染色法检测IL-6分泌及TNF-α表达；PNPP法检测细胞内ALP活性；ELISA法检测RANKL分泌；茜素红染色法检测细胞钙化程度；RT-PCR法检测分化相关基因表达情况。
　　结果：Cu-Glu-CMC螯合饱和容量约为58.6μg·mg-1238U，且抗氧化活性与壳聚糖（CTS）相比明显提高。DU急性染毒后，MC3T3-E1细胞活性及不同分化状态下MC3T3-E1细胞内的DU蓄积量，均具有浓度依赖性和时间依赖性，细胞内活性氧（ROS）含量明显升高，MDA增加同时SOD活性减低，IL-6分泌减少，TNF-α生成增加；与DU组相比，Cu-Glu-CMC可明显降低DU所致细胞毒性，减少DU的细胞内蓄积；减轻细胞的ROS水平和MDA含量，提高SOD活性；提高IL-6分泌、降低TNF-α形成。DU慢性染毒后，细胞内有DU蓄积而细胞活力无明显改变，ALP活性降低，RANKL分泌增加，钙化结节形成减少，MC3T3-E1细胞分化过程中相关基因如runx2、col-1α、bsp、bgp等的表达减少；与DU组相比，Cu-Glu-CMC可提高ALP活性，降低RANKL分泌，增加钙化结节形成，促进分化相关基因表达。
　　结论：Cu-Glu-CMC对DU所致MC3T3-E1细胞的毒性作用具有明显保护作用，可能与以下机制有关：
　　①Cu-Glu-CMC可减少DU的细胞内蓄积所致毒性；
　　②Cu-Glu-CMC可降低细胞内ROS含量，减轻自由基损伤，提高细胞清除自由基能力；
　　③Cu-Glu-CMC可减轻DU所致炎症损伤；
　　④Cu-Glu-CMC可明显改善DU所致MC3T3-E1细胞的分化抑制作用，减轻DU对MC3T3-E1分化各阶段相关基因及蛋白表达的抑制作用。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

目录

前 言

一、研究背景

二、课题设计思路

第一部分 Cu2+印迹戊二醛交联羧甲基壳低聚糖的体外化学作用

材 料

实验方法

结 果

小 结

第二部分 Cu2+印迹戊二醛交联羧甲基壳低聚糖对贫铀致细胞毒性的保护作用

材 料

实验方法

实验结果

小 结

第三部分 Cu2+印迹戊二醛交联羧甲基壳低聚糖对贫铀抑制细胞分化的保护作用

材 料

实验方法

实验结果

小 结

讨 论

结 论

参考文献

攻读学位期间发表的论文

中英文缩略词对照表

综 述

致谢