载脂蛋白M在高糖环境下对人视网膜内皮细胞的保护作用

摘要

背景与目的：糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病（diabetes mellitus，DM）最严重的并发症之一，其发病率与DM的病程长短密切相关。DR是工作人群首要致盲原因，严重影响病人的生存质量，近年来随着人们生活水平的提高以及生活方式的改变，DR的发病率呈现逐年上升的趋势，由此增加的医疗护理成本也带来了严重的社会问题。但DR的发病机制至今尚未完全阐明，经典的DR发病机制包括：炎症和免疫因素，氧自由基和氧化应激，聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶激活，多元醇通路，蛋白激酶C激活等。近年来，越来越多的研究提出了慢性炎症和统一通路学说，为DR发病机制提出了新的方向。载脂蛋白M（apolipoprotein M，apoM）是由 Xu和Dahlb?ck发现并从血浆富甘油三酯中分离及克隆的人类载脂蛋白，主要存在于人血浆高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)。目前的研究显示apoM可能和心脑血管性疾病如糖尿病、冠心病、肥胖症等相关。本文旨在探讨高糖环境下人视网膜内皮细胞（human retinal endothelial cells， hRECs）中apoM和炎症因子表达的变化，以及apoM在高糖环境下是否对hRECs有保护作用。
　　方法：1.将hRECs在正常糖浓度（5.5mM）和高糖(30mM）环境下干预24 h后抽提细胞RNA，运用RT-PCR技术检测apoM、MCP-1、TNF-αmRNA的表达。
　　2.将空载慢病毒及载有apoM序列的慢病毒分别感染hRECs，运用RT-PCR技术和Western blot技术检测正常糖浓度（5.5mM）和高糖(30mM）环境下apoM mRNA和蛋白表达。
　　3.将空载组及apoM过表达组细胞在高糖(30mM）环境下干预24 h后抽提细胞RNA，运用RT-PCR技术检测MCP-1、TNF-αmRNA的表达。
　　结果：1.与正常糖浓度比较，高糖组apoM、MCP-1、TNF-α的mRNA表达明显增加（P＜0.05）。
　　2.过表达apoM后，hRECs中apoM的mRNA及蛋白水平显著升高（P＜0.05）。与正常糖浓度比较，apoM过表达组在高糖环境下apoM蛋白表达显著上升（P＜0.05）。
　　3.在高糖环境下，apoM过表达组较空载组MCP-1、TNF-αmRNA的表达显著降低（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.早期高糖环境在mRNA水平促进了hRECs中apoM、MCP-1、TNF-α的表达。
　　2. hRECs被载有apoM的慢病毒感染后，apoM的mRNA及蛋白水平高表达，提示病毒感染成功。同时，高糖在蛋白水平促进了hRECs中apoM的表达。
　　3.在高糖环境下，过表达apoM可能通过抑制MCP-1和TNF-α的表达，从而保护视网膜内皮细胞，参与糖尿病视网膜病变的发生和发展。

目录

声明

前言

第一部分 不同糖浓度下人视网膜毛细血管内皮细胞内apoM、TNF-α、MCP-1 mRNA的表达

一、材料和方法

1.实验材料

2.仪器设备

3.实验对象

4.试剂配制

5.实验方法

二、结果

三、讨论

第二部分 hRECs通过慢病毒感染过表达apoM及apoM在高糖环境下对hRECs的保护作用

一、材料和方法

1.实验材料：

2.仪器设备：

3.实验对象

4.试剂配制：

5.实验方法

二、结果

1. 用荧光倒置显微镜观察慢病毒感染hRECs细胞的荧光表达情况

2.慢病毒感染hRECs后apoM表达的影响

3. hRECs过表达apoM基因在高糖环境下对hRECs内MCP-1、TNF-αmRNA表达的影响

三、讨论

结论

参考文献

综述:TNF-α与糖尿病视网膜病变的研究进展

中英文缩略词表

攻读学位期间发表学术论文

致谢