银杏叶提取物在高糖环境下对人视网膜微血管内皮细胞的作用及可能机制

摘要

目的 研究不同浓度的银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)在高糖环境下对人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells,HRCEC)的作用及对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)和核转录因子κB(nuclear transcription factor kappaB,NF-κB)p65表达的影响,为糖尿病视网膜病变的药物防治提供新的思路和理论依据.方法 体外原代培养HRCEC,并通过免疫细胞化学方法鉴定；用GBE作用于原代培养的HRCEC,实验分为空白对照组、低糖对照组、高糖对照组、高糖+不同浓度GBE(12.5 mg·L-1、25.0 mg·L-1、50.0 mg·L-1、100.0 mg·L-1)组,分别使用MTT比色法观察其对细胞增殖的影响,使用免疫细胞化学及Western blotting检测药物作用前后HRCEC中MMP2及NF-κB p65的表达.结果 MTT比色法结果显示,用不同浓度的GBE处理高糖(25.0 mmol· L-1)环境下HRCEC,作用24 h、48 h和72 h,高糖+不同浓度GBE对HRCEC增殖有促进作用,并存在时间和浓度的依赖性.高糖+不同浓度(12.5 mg·L-1、25.0 mg·L-1、50.0 mg·L-1、100.0 mg·L-1)GBE组作用24h细胞增殖率分别为(16.4±0.7)％、(30.6±0.8)％、(41.3±1.5)％、(52.6±1.8)％,作用48 h细胞增殖率分别为(21.8±1.2)％、(36.2±1.3)％、(48.0±1.4)％、(62.7±1.6)％,作用72 h细胞增殖率分别为(29.9±0.5)％、(46.2±0.8)％、(61.2±0.8)％、(73.4±1.6)％.随着药物浓度的逐渐提高和作用时间的增加,细胞存活率逐渐提高,而细胞抑制率逐渐下降.用不同浓度的GBE处理HRCEC,作用72 h,行免疫细胞化学检测MMP2的表达,运用Western blotting检测NF-κB pp65的表达,发现随着GBE药物浓度的增高,高糖环境下HRCEC中的MMP2、NF-κB p65表达量逐渐减少(P＜0.05).结论 GBE可以保护高糖环境下HRCEC并下调MMP2、NF-κB p65的表达,可用于糖尿病视网膜病变的防治.