高糖环境下lncRNA MEG3对人视网膜血管内皮细胞增殖和迁移的作用及其机制

摘要

目的 探讨高糖环境下lncRNA MEG3对人视网膜血管内皮细胞(hRECs)生长的作用及其机制.方法 采用qRT-PCR检测高糖和正常环境下hRECs中lncRNA MEG3的表达;构建lncRNA MEG3过表达质粒及沉默质粒,利用CCK-8法、Transwell实验以及划痕实验检测lncRNA MEG3对hRECs增殖、愈合及迁移能力的影响.利用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG3和miR-223-3p的靶向结合,并外加miR-223-3p观察对ln-cRNA MEG3过表达的作用.Western blot检测lncRNA MEG3对hRECs中FBXW7蛋白表达的影响.过表达或沉默PABPC1后,利用qRT-PCR检测hRECs中lncRNA MEG3表达水平.结果 与正常培养环境相比,高糖环境下hRECs中lncRNA MEG3表达下降(F=73.613,P=0.001).CCK-8法检测发现,lncRNA MEG3过表达可显著降低hRECs增殖,而miR-223-3p的添加可逆转这一现象;划痕实验结果显示,lncRNA MEG3过表达(高糖)组hRECs愈合速度显著低于过表达对照(高糖)组(F=121.193,P<0.001);lncRNA MEG3沉默(高糖)组hRECs愈合速度略高于lncRNA MEG3沉默对照(高糖)组,但两者差异无统计学意义(F=0.689,P=0.453);miR-223-3p可显著降低lncRNA MEG3过表达对hRECs愈合能力的抑制(F=110.016,P<0.001).Transwell实验结果显示,lncRNA MEG3过表达(高糖)组hRECs迁移能力显著低于过表达对照(高糖)组(F=22.407,P=0.009);lncRNA MEG3沉默(高糖)组hRECs迁移能力显著高于lncRNA MEG3沉默对照(高糖)组(F=17.093,P=0.014);miR-223-3p可显著降低lncRNA MEG3过表达对hRECs迁移能力的抑制(F=33.338,P=0.004).在双荧光素酶报告基因实验中,共转染miR-223-3p后,突变型lncRNA MEG3(位点1和位点2)的荧光素酶活性均显著下降(野生型:F=66.691,P=0.001;突变位点1:F=58.657,P=0.002;突变位点2:F=29.104,P=0.006).Western blot检测结果显示,过表达lncRNA MEG3后,hRECs中FBXW7蛋白的相对表达量明显升高(F=185.443,P<0.001),而miR-223-3p的添加逆转了这一趋势(F=162.257,P<0.001).沉默了PABPC1后,hRECs中lncRNA MEG3相对表达水平显著下降(F=145.293,P<0.001),而PABPC1基因的过表达则导致hRECs中lncRNA MEG3相对表达水平上调(F=70.638,P=0.001).结论 在高糖环境下,lncRNA MEG3通过与miR-223-3p的直接相互作用调控下游的相关靶点,抑制hRECs增殖与迁移;而其上游的调控元件可能为PABPC1.