供体γδT细胞和受体“unlicensed”Ly49+NK细胞在GVHD中的作用及其机制研究

摘要

第一部分、供体γδT细胞在异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病中的作用与机制研究
　　目的：探究供体γδT细胞在急性GVHD中的作用及其机制。
　　方法：BALB/c(H2Kd)受体鼠接受750cGy全身性致死性辐照，4小时后通过尾静脉注射的方法输注1×107C57BL/6(H2Kb)WT或者TCRδ-/-小鼠来源的骨髓细胞和5×106全脾细胞，建立aGVHD模型。观察小鼠生存和体重变化，记录aGVHD评分。移植后第14天采用流式细胞术检测两组小鼠的脾脏、肝脏、肺脏和小肠四个脏器中的免疫细胞表型。体外培养小鼠γδT、Vγ1、Vγ4细胞，移植后第0天给小鼠分别尾静脉输注1×107个γδT、Vγ1、Vγ4细胞，建立aGVHD模型。观察小鼠生存和体重变化，记录aGVHD评分。移植后第14天采用流式细胞术检测两组小鼠的脾脏、肝脏、肺脏和小肠四个脏器中的免疫细胞的表型。
　　结果：在小鼠aGVHD中，供体来源的γδT细胞的缺失影响了小鼠供体造血干细胞的植入，并且促进了DC和T细胞在靶器官中的浸润，从而加重aGVHD。而过继输注Vγ4细胞可以显著抑制T细胞的浸润，并且增加MDSC的比例，缓解小鼠aGVHD症状。
　　结论：供体来源的γδT细胞在小鼠aGVHD的发生发展中发挥着保护作用，其中Vγ4亚型可以显著缓解aGVHD症状。
　　第二部分、受体“unlicensed”Ly49+N K细胞在慢性移植物抗宿主病中的作用与机制研究
　　目的：探究受体“licensed”和“unlicensed”Ly49+N K细胞在慢性GVHD中的作用及其机制。
　　方法：1.5 X107 DBA/2(H2Kd) WT供体鼠CD4+T细胞，经尾静脉输注至B6D2F1(H2Kb/d)受体鼠体内，构建小鼠cGVHD模型；每2周收集小鼠尿液及静脉血血清，检测尿蛋白及anti-dsDNA抗体的含量变化，动态监测小鼠的疾病发生过程。造模后第2周和第8周采用流式细胞术检测小鼠脾脏中的免疫细胞的表型。造模后第10周分离小鼠肾脏，进行H&E染色，观察小鼠肾脏损伤情况。
　　结果：受体NK细胞在cGVHD的进程中发挥着保护作用。早期或者持续性清除受体N K细胞会引起血清中anti-dsDNA抗体的含量升高，以及引起CD4+ T细胞和B细胞的数量增加和激活。其中

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