虎耳草及其主要活性成分以及对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抗肿瘤作用

摘要

虎耳草（Saxifraga stolonifera(L.).Meeb.）是一种常绿草本植物，既可以用作景观植物，也可以被当做药物使用。本实验以传统中药虎耳草为研究对象，首先分析和鉴定了虎耳草中主要的活性成分，然后通过对Lewis肺癌移植瘤小鼠添食虎耳草提取物着重研究了虎耳草提取物的抗肿瘤作用，并且初步探讨其作用机制。更进一步，通过给Lewis肺癌移植瘤小鼠注射虎耳草中的三个主要活性物质——没食子酸、原儿茶酸和岩白菜素，来探讨这三种物质联合使用是否也能够抑制Lewis肺癌移植瘤小鼠肿瘤的生长。本研究将为虎耳草的药理学研究提供重要的参考，也为虎耳草主要活性成分及其抗肺癌作用提供重要的实验数据。
　　本文的研究主要涉及以下内容：
　　(1)在这部分研究中，首先测定了虎耳草中粗多糖的含量以及各种氨基酸的含量，然后对虎耳草乙醇提取物中的活性成分进行了分析和鉴定。实验结果表明，虎耳草中的粗多糖含量达到6.80％，而含量最多和最低的氨基酸分别是缬氨酸和半胱氨酸，分别达到26.24mg/g和0.19mg/g。此外，HPLC和质谱实验结果表明虎耳草中的活性成分主要有四种，分别是没食子酸、去甲基岩白菜素、原儿茶酸和岩白菜素，因为没有去甲基岩白菜素的标准品，故仅对其余三种单体作了定量分析，这三种物质在虎耳草干粉中的含量分别为0.361、0.060、2.872mg/g。同时，我们对苏州产的虎耳草地上部分和地下部分中这三种物质含量分布做了研究，结果表明，苏州产虎耳草地下部分中没食子酸含量远远高于其地上部分，相差5倍左右，而地下部分原儿茶酸和岩白菜素含量又远低于地上部分，分别相差约5倍和8倍。此外，在中国不同地方栽培的虎耳草中这三种活性物质的含量也存在着巨大的差异。本研究中应用HPLC-DAD法测定没食子酸、原儿茶酸和岩白菜素含量的方法显示出良好的重复性（RSD3.869%，9.104%和2.332%）和回收率（分别为102.49%，99.69%和105.05%）。
　　(2)在这部分研究中，首先对虎耳草添食 C57小鼠做了毒理性评估，接着利用Lewis肺癌移植瘤小鼠模型，通过口服添食虎耳草提取物进行了抗肿瘤活性试验。结果表明，虎耳草添食对C57小鼠并无毒性。对Lewis肺癌移植瘤小鼠添食20%虎耳草约15天后，发现添食虎耳草组的Lewis肺癌移植瘤小鼠的肿瘤生长得到了抑制，其对肿瘤的抑制率可以达到49.2%。通过肿瘤组织HE染色和免疫组织化学观察后，发现添食虎耳草后Lewis肺癌移植瘤小鼠的肺肿瘤细胞出现了大面积的坏死。此外，实验发现虎耳草添食能够促进小鼠血清中SOD活力增加，进而增强小鼠机体去除ROS的能力，同时虎耳草添食还能引起Lewis肺癌移植瘤小鼠肺肿瘤细胞的凋亡，促进Lewis肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织中p53、Sox30和Bax基因的表达，抑制Bcl2基因的表达。综合上述结果可以得出，虎耳草能够提升Lewis肺癌移植瘤小鼠抗氧化能力以及促进肿瘤细胞的凋亡，从而抑制Lewis肺癌移植瘤小鼠的肿瘤生长。
　　(3)这一部分的研究主要通过对Lewis肺癌模型小鼠联合注射没食子酸、原儿茶酸和岩白菜素溶液（三联体），来评估三联体注射对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤作用。实验结果表明，三联体联合注射使Lewis肺癌移植瘤小鼠具有抗血管生成和抗肿瘤作用，其抑瘤率达到41.00%。研究发现Lewis肺癌移植瘤小鼠在注射三联体后肿瘤细胞的CD34蛋白表达显著降低，表明三联体能够有效地抑制Lewis肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织的血管生成。此外，Tunnel染色结果表明Lewis肺癌移植瘤小鼠在注射三联体后肿瘤细胞开始出现大面积的凋亡现象。对经过三联体注射治疗后的Lewis肺癌移植瘤小鼠血液系统的检测还发现，在荷瘤后其血液系统遭到了非常严重的破坏，而三联体联合注射能够对受损的血液系统有一定的修复作用。除此之外，实验中我们还发现Lewis肺癌移植瘤小鼠在荷瘤后会出现脾肿大的现象，因而其脾系数较正常小鼠要大得多，而经过三联体注射治疗后，脾系数显著地降低，这说明三联体能够提升Lewis肺癌移植瘤小鼠的免疫能力。综上所述，Lewis模型小鼠经过三联体注射治疗后，无论是血管生成还是肿瘤生长都得到了一定的抑制。然而，如果想要把三联体注射治疗开发成为一种有效治疗肺肿瘤的治疗手段，还需要对三联体的抗血管生成和抗肿瘤的作用机制做更深入和详细地研究。

目录

声明

第一部分 文献综述

1. 虎耳草的分布以及其活性物质组成

2. 虎耳草中活性物质分离方法

3. 虎耳草中主要的成分及其潜在的药理作用

4. 虎耳草的药理作用.

5. 虎耳草作为传统中药的应用

6. 虎耳草研究展望

7. 研究思路

8. 研究内容

9. 本论文创新点

10. 参考文献

第二部分 虎耳草主要活性成分的鉴定与分析

1. 引言

2. 材料和方法

3. 结果和讨论

4. 结论

5. 参考文献

第三部分 虎耳草水提物对Lewis肺癌小鼠具有抗肿瘤作用

1.引言

2.材料和方法

3. 实验结果与讨论

4.结论

5. 参考文献

第四部分 没食子酸、原儿茶酸和岩白菜素联合注射对Lewis肺癌移植瘤小鼠的抗肿瘤作用

1. 引言

2. 材料和方法

3. 结果与讨论

4. 结论

5. 参考文献

结论与展望

1. 综合结论

2．本文存在的不足

3. 虎耳草研究的展望

攻读学位期间公开发表的论文

基金资助

致谢