根癌农杆菌介导马铃薯蛋白酶抑制剂基因PI-Ⅱ转化籼稻的研究

摘要

该研究应用农杆菌介导水稻遗传转化体系,将马铃薯蛋白抑制剂基因PI-Ⅱ导入籼稻品种粤香占和T461,最后获得T461转基因株系75个,113棵单株.主要结果如下:(1)根癌农杆菌介导籼稻的遗传转化存在明显的基因型依赖性,T461抗性愈伤组织在不同的分化培养基上均能分化成苗,但粤香占的抗性愈伤组织则极难分化,未能获得转化株系.(2)不同的菌株转化T461时,转化效率存在很大差异,在所获得的75个转基因株系中,有73个株系由超毒力菌株EHA105介导得来,转化率大于10﹪,另有2个株系由普通型菌株LBA4404介导得来,转化率仅为1.5﹪.(3)不同的筛选次数对T461抗性愈伤组织分化率影响很大,只经过一轮筛选的抗性愈伤组织分化率高达50﹪,而经过两轮筛选的抗性愈伤组织分化率只有14.3﹪,主要原因可能是长期选择继代培养引起部分抗性愈伤组织分化能力的丧失,导致分化率下降.(4)PCR结果表明在108棵所检测的转基因植株中有101株含有目的基因PI-Ⅱ的特异性片段,阳性率为93.5﹪,Southern检测进一步证明PI-Ⅱ基因已整合到T461的基因组中.(5)采用离体叶片法对T461转基因植株进行初步抗虫性鉴定,结果表明,与对照相比,大部分转基因植株获得了对二化螟幼虫的抗性,但不同单株的抗虫性存在比较明显的个体差异.(6)经过一轮选择而来的转基因植株PCR阴性率为5.7﹪,经过两轮选择而来的转基因植株PCR阴性率为7.9﹪;比较分析以上两类转基因植株对二化螟的平均抗性,前者略高于后者.

目录

文摘

英文文摘

第一部分 文献综述

1抗虫转基因植物研究进展

1.1苏云金杆菌毒蛋白基因(Bt)

1.2植物来源的杀虫基因

1.3昆虫毒素基因及其它抗虫基因

2转基因抗虫作物的安全性评价及提高外源抗虫基因在植物体内的表达

2.1安全性问题

2.2提高外源抗虫基因在植物体内的表达

3农杆菌介导水稻遗传转化史

4本研究的目的和内容

第二部分 研究报告

1材料和方法

1.1材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1基因转化

2.2转基因植株的分子检测

2.3转基因植株的生物检测

3讨论

3.1影响转化效率的因素

3.2 PI-Ⅱ基因特性及其抗性表达

参考文献

附录A 主要化学药品及仪器

附录B 缩略词表

致谢