健脾化瘀方对人肠癌SW480细胞株凋亡和细胞周期的影响及其作用机制

摘要

研究目的:
　　探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480细胞株凋亡与细胞周期的影响，从细胞周期和细胞凋亡的角度进一步阐明健脾化瘀方抑制大肠癌生长增殖及促凋亡的可能机制，为中医药治疗肿瘤提供新的理论支持。
　　研究方法:
　　1.MTT法检测不同时间各个浓度的健脾化瘀方对SW480细胞增殖的影响。
　　2.流式细胞仪检测健脾化瘀方对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响。
　　3.RT-qPCR法检测健脾化瘀方对SW480细胞中cyclinD1、cyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6、p27、Bax、Bcl-2基因表达的影响。
　　4.Western Blot法检测健脾化瘀方对SW480细胞中cyclinD1、cyclinD2、cyclinD3、cyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6、p27、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved caspase-3、PARP、cleavedPARP蛋白表达的影响。
　　研究结果:
　　1.健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用，且呈现量效和时效关系。
　　2.健脾化瘀方作用于SW480细胞后能促进细胞凋亡，阻滞细胞周期于G0/G1期。
　　3.健脾化瘀方作用于SW480细胞后cyclinD1、cyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6、Bcl-2基因表达下降， p27、Bax基因表达上升。
　　4.健脾化瘀方作用于SW480细胞后cyclinD1、cyclinD2、cyclinD3、cyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6、Bcl-2、caspase-3、PARP蛋白表达下降， p27、Bax、cleaved caspase-3、cleaved PARP蛋白表达上升。
　　研究结论:
　　健脾化瘀方对人肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用，其机制可能是影响cyclinD1、cyclinD2、cyclinD3、cyclinE1、CDK2、CDK4、CDK6、p27、Bax、Bcl-2、caspase-3、cleavedcaspase-3、PARP、cleaved PARP的表达，引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡，进而抑制SW480细胞的增殖。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1．中医学对大肠癌的认识

1．1 大肠癌的病名认识

1．2 大肠癌的病因病机

1．3 健脾化瘀法是大肠癌的主要治则治法

2．大肠癌细胞周期相关机制研究

2．1 大肠癌细胞周期失控机制

2．2 细胞周期与肿瘤治疗

2．3 中药对大肠癌细胞周期的影响

3．大肠癌细胞凋亡相关机制研究

3．1 凋亡的分子机制

3．2 凋亡与肿瘤的发生

3．3 凋亡与肿瘤治疗

3．4 中药对大肠癌细胞凋亡的影响

第二部分 实验研究

1 实验材料

1．1 药物制备

1．2 细胞株

1．3 试剂

1．4 主要仪器设备

1．5 实验试剂及药物的配置

2．实验方法

2．1 四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验

2．2 细胞凋亡实验

2．3 细胞周期实验

2．4 RT-qPCR实验

2．5 Western Blot实验

2．6 统计学分析

3 实验结果

3．1 健脾化瘀方对SW480细胞增殖的影响

3．2 健脾化瘀方对SW480细胞凋亡的影响

3．3 健脾化瘀方对SW480细胞周期的影响

3．4 健脾化瘀方对SW480细胞凋亡与细胞周期相关基因表达的影响

3．5 健脾化瘀方对SW480细胞凋亡与细胞周期相关蛋白表达的影响

第三部分 讨论

1．细胞周期

2．细胞凋亡

2．1 Caspase及PARP与肿瘤细胞凋亡

2．2 Bc1-2及其家族与肿瘤细胞凋亡

3．实验结果分析

3．1 MTT结果分析

3．2 流式结果分析

3．3 RT-qPCR和Western Blot结果分析

第四部分 结语

参考文献

附录

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢