北京地区牛传染性鼻气管炎血清学调查及其抗体检测间接ELISA方法的建立

摘要

为了解北京地区奶牛IBR流行情况，用IDEXX IBRgE抗体检测试剂盒检测来自北京不同地区的2582份牛血样。结果显示，调查的地区均有IBRV抗体阳性牛存在，其中昌平23.6％（245/1037），房山100%（50/50），延庆50.63%（202/399），顺义60%（9/15），丰台30.03%（164/546），密云43.46（232/535），总阳性率为34.93%（902/2582）。血清学调查结果表明，目前北京地区IBR流行情况严重，应尽快采取相应的措施。
　　为建立一种检测IBRV的方法，试验将IBRV接种MDBK细胞，以浓缩纯化的IBRV作为包被抗原，建立了间接ELISA检测方法。通过棋盘法确定了抗原的最佳包被浓度和血清的最佳稀释倍数。抗原包被浓度20μg/mL，4℃过夜；PBST洗涤；3%BSA的PBST作为封闭液，37℃封闭2h；血清用PBST作1:80稀释，100μL/孔，37℃度作用1h；HRP-兔抗牛IgG用3%BSA的PBST作1:20000倍稀释，37℃作用1h；TMB底物室温避光显色10min。阴、阳性血清临界值为0.240。特异性试验结果表明，IBRV阳性血清被检为阳性，BVDV、牛白血病病毒、副结核病病毒阳性血清均被检为阴性。敏感性试验结果表明，IDEXX试剂盒中的标准阳性血清1:640倍稀释时仍能检出阳性抗体。与中和试验相比，特异性为100%（23/23），敏感性为82.76%（24/29）。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，表明该方法重复性好。与IDEXX试剂盒相比，阳性符合率为87.7%（228/260），阴性符合率为98%（196/200）。以上结果表明所建立的间接ELISA方法可用于IBRV感染的监测，并替代目前市场上昂贵的IBR进口检测试剂盒。

目录

声明

缩略词表

第一章 牛传染性鼻气管炎诊断方法研究进展

1 牛传染性鼻气管炎概述

1.1 牛传染性鼻气管炎病毒的病原学

1.2 牛传染性鼻气管炎病毒的传播

1.3 牛传染性鼻气管炎的流行病学

2.1 病原学诊断

2.2 血清学诊断

2.3 胶体金技术

3 研究目的和意义

第二章 北京地区牛传染性鼻气管炎血清学调查

1 材料

1.1 血清样品

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 方法

2.1 试验方法

2.2 统计方法

3.1 北京地区IBR血清学调查

3.2 卡方检验

3.3 北京地区IBR流行趋势

4 讨论

第三章 IBR抗体检测间接ELISA方法的建立

1 材料

1.1 病毒和细胞

1.2 血清和抗体

1.3 主要试剂

1.4 主要仪器

1.5 主要试剂的配制

2.1 IBRV抗原的制备

2.2 间接ELISA方法的建立

3 结果与分析

3.1 IBRV抗原的制备

3.2 间接ELISA方法的建立

4 讨论

4.1 ELISA包被抗原的选择

4.2 封闭液的选择

4.3 HRP-兔抗牛IgG稀释液的选择

4.4 间接ELISA与IDEXX 试剂盒的比较

4.5 间接ELISA与中和试验的比较

结论

展望

参考文献

致谢

附录1

附录2