药用植物半枝莲的组织培养及多倍体诱导

摘要

药用植物半枝莲(Scutellaria barbata D．Don)是一种应用范围广、使用量大和药效功能多的传统中药，近年研究表明还具有良好的抗肿瘤作用。诱导多倍体能够提高药用植物药用成分的报道屡见不鲜，这种方法切实可行。本文以此为理论依据，先建立半枝莲的离体快繁体系，秋水仙素处理茎尖诱导半枝莲多倍体植株并进行鉴定，最后测定已确定的多倍体株系的药用成分总黄酮含量。 以半枝莲盆栽苗的茎尖为起始材料，用含2％有效氯的NaC10溶液消毒5rain，转入MS基本培养基中生长获得无菌小苗。分别切取无菌小苗1cm长的茎尖、0.8cm长带腋芽的茎段和不带腋芽的茎段为组织培养的外植体。 半枝莲的离体快繁体系建立：以1cm茎尖为外植体，用激素6-BA和IBA组合诱导丛生芽，MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L诱导的丛生芽最多，增殖系数为6.5；以1cm茎尖为外植体，用激素6-BA和NAA组合诱导丛生芽，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0 mg/L诱导的丛生芽最多，增殖系数为6.1；以0.8cm带腋芽的茎段为外植体，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0mg/L诱导的丛生芽最多，增殖系数为5.7；以0.8cm带腋芽的茎段为外植体横放在培养基上，MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0 mg/L诱导的丛生芽最多，增殖系数为4.8。故诱导丛生芽的最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1 mg/L。 半枝莲愈伤的诱导：以叶片和茎段为外植体，在激素6-BA和NAA组合的培养基上诱导愈伤，均未成功。 半枝莲多倍体的诱导鉴定：0.2％的秋水仙素浸泡茎尖3h诱导的多倍体最多，诱导率高达10％，存活率为25％。分别从半枝莲的形态特征和细胞学方面对对照和多倍体进行了比较，并利用流式细胞仪对4个株系进行了鉴定，均为多倍体嵌合体。测定其中3个半枝莲多倍体株系的药用成分总黄酮的含量，分别是1.88％、1.85％和1.69％，未处理的正常对照株系是1.67％；加样回收率为99.1％，相对标准差为3.56％。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

1文献综述

1.1药用植物半枝莲的研究现状

1.2药用植物多倍体诱导的研究进展

2本研究的目的意义、思路及创新性

2.1目的意义

2.2思路

2.3创新性

第一章药用植物半枝莲的离体快繁

一、材料与方法

1材料

2方法

二、结果与分析

1无菌小苗的获得

2不同激素对丛生芽诱导的影响

三、讨论

1无菌苗的消毒

2诱导丛生芽激素的选用

3愈伤诱导的问题

4以带腋芽的茎段为外植体诱导丛生芽

5实验中的玻璃化现象

6以无菌小苗的茎尖为外植体诱导生根

第二章药用植物半枝莲的多倍体诱导及鉴定

一、材料与方法

1材料

2方法

二、结果与分析

1秋水仙素诱导多倍体

2多倍体鉴定

三讨论

1合适的处理方法、时间及药品浓度

2影响诱导机率的因子

3嵌合体问题

4多倍体的鉴定

第三章药用植物半枝莲多倍体植株有效成分总黄酮测定

一、原理、仪器与方法

1原理

2仪器

3方法

二、结果与分析

1稳定性实验

2样品测定

3回收率实验

三、讨论

全文结论

参考文献

附录

致谢