Trichoderma reesei纤维素内切酶的性质研究

摘要

纤维素(cellulose)占全球植物总干重的30％-50％，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，但其中89％尚未被利用或未被合理利用，造成资源的极大浪费。因此，对纤维素酶的研究具有重大意义。 丝状真菌瑞氏木霉(Trichoderma reesei)具有降解纤维素和半纤维素的完全酶系，共八种不同的纤维素酶，分别属于七种不同的族群(CBHⅠ，CBHⅡ，EGⅠ，EGⅡ，EGⅢ，酶B，BGⅠ，BGLⅡ)。通过凝胶电泳的方法，分离得到一种分子量大约为70KD的蛋白质。通过对其性质的研究，确认其为纤维素内切酶。这种纤维素内切酶的最适pH为5.6，最适温度为45℃，Km＝9.55mg/ml，Vmax=2.625ug/min。 在测此酶的动力学常数时，以CMC-Na为底物发现其中的还原糖量在上升到一定量后出现了一个下降趋势。后分别以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal为底物，发现也存在此现象。 当底物为CMC-Na时，测定体系中还原糖量在125分钟内的变化，发现其中的还原糖含量成周期性振荡，周期大约25.00±2.37分钟。再以葡萄糖为底物，测定体系中还原糖量在180分钟内的变化，发现其中的还原糖含量也成周期性振荡，周期大约为45±2.78分钟。出现此现象的原因是这种纤维素内切酶有糖苷合成活性。 为进一步验证这种纤维素内切酶的糖苷合成活性，以葡萄糖为底物，将15分钟时出现第一个反应低点的反应产物进行乙酰化，进行GC/MS检测，结果证实体系中确实合成了多糖。由此确定了这种纤维素内切酶具有糖苷合成活性。

目录

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摘要

第一章纤维素酶的研究进展

1.纤维素酶底物的结构

1.1纤维素的结构

2纤维素酶的来源、分类

2.1纤维素酶的来源

2.2纤维素酶的分类

3纤维素酶的结构

3.1催化域结构和功能的研究

4纤维素酶的降解机制

参考文献

第二章纤维素酶的性质研究

1纤维素酶的酶学性质

1.1温度对纤维素酶活性的影响

1.2pH对纤维素酶活性的影响

1.3底物浓度对酶解的影响

2.纤维素酶活力测定

2.1外切葡萄糖苷酶(CBH)活力测定

2.2内切葡萄糖苷糖酶(EG)活力的测定

2.3 β-葡萄糖苷酶(BG)活力测定

2.4滤纸酶活

3糖苷合成酶的研究进展

3.1糖苷合成酶的研究进展

3.2糖苷合成酶的反应机制

参考文献

第三章酶B的纯化及鉴定

1实验材料

1.1实验材料和仪器

1.2主要实验仪器

2方法

2.1PAGE

2.2纯酶的切胶回收

2.3酶活的测定方法

2.4纤维素酶三种酶活性的测定方法

2.5pH对酶活的影响

2.6时间对酶活得影响

2.7动力学常数的测定

2.8数据统计分析

3结果与讨论

3.1组分的分离与纯化

3.2pH对酶活的影响

3.2温度对酶活的影响

3.3时间对酶活的影响

3.4酶的Km及Vmax的测定

3.5 B酶属性分析

参考文献

第四章酶B糖苷合成性质研究

1.实验材料和试剂

2.方法

3.数据统计分析

4.结果与讨论

4.1时间对酶活的影响

小结

参考文献

致谢