蛋白核小球藻多糖制备及其增强免疫功能的研究

摘要

本文研究了用膜分离技术从单细胞绿藻蛋白核小球藻粉中分离提取蛋白核小球藻多糖的技术，并采用凝胶柱层析法将其纯化分离成两个组分，再用高效液相色谱法测定其相对分子量，用气相色谱法分析其单糖组成，用红外光谱法分析链接方式及官能团。并且，又研究了蛋白核小球藻粗多糖的巨噬细胞吞噬作用及其体液免疫和细胞免疫的功能。结果如下：　　通过将提取影响因素用L16(45)正交试验研究，结果表明：用超声波1000W破碎800s、100℃沸水浴提取4小时、加入的乙醇在多糖溶液中浓度为80﹪时，蛋白核小球藻多糖的得率最高；在此最佳条件下用3﹪的三氯乙酸除蛋白时多糖纯度最高；用膜分离技术分离纯化蛋白核小球藻多糖时，宜先用0.1μm的微滤膜过滤(压力0Psi，温度25-40℃)，再用3K的超滤膜过滤(温度25-40℃，进口压15Psi，回流压11Psi)，将浓缩液再用80﹪的乙醇溶液进行沉淀，可以得到得率为4.76﹪，纯度为60.03﹪的蛋白核小球藻多糖。将蛋白核小球藻多糖用琼脂糖凝胶层析分离后可得到两种分子量不同的组分。　　用高效液相色谱法测定了蛋白核小球藻多糖两个精制组分的相对分子量，CPS1和CPS2的峰值分子量分别为81877Da和1749Da。再用气相色谱法分析其单糖组成，发现其主要单糖组成成分为甘露糖。另外，通过红外吸收光谱分析可知，两个样品均呈现出多糖的典型特征吸收峰，均以α-吡喃糖为单体构成多糖组分。用动物试验评价蛋白核小球藻多糖的增强免疫力的功能。按0.4ml/20g·BW的量灌胃给予小鼠100mgmL-1、50mgmL-1和25mgmL-1三个剂量的蛋白核小球藻多糖溶液，连续进行30天。测定各实验组的体重、相关脏器重，迟发型变态反应(DTH)、血清凝集素抗体积数和吞噬细胞作用。结果表明，在100mgmL-1和50mgmL-1的剂量下，小鼠的吞噬指数、吞噬率和迟发型变态反应(DTH)、抗体积数与对照相比，差异都十分显著(P＜0.05)；而在25mgmL-1的剂量下，小鼠只在非特异性免疫和体液免疫(即在吞噬指数、吞噬率和抗体积数)中与对照相比差异显著(P＜0.05)。这表明，蛋白核小球藻多糖对小鼠的免疫功能有显著的调节作用，其活性依赖于蛋白核小球藻多糖的试验剂量。

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第一章海藻多糖的制备及其生物学功能研究进展

1.1海藻多糖的生物学功能

1.1.1海藻多糖的免疫调节活性

1.1.2海藻多糖的抗癌活性

1.1.3海藻多糖的抗病毒活性

1.1.4海藻多糖的抗突变功能

1.1.5海藻多糖的抗氧化活性

1.1.6海藻多糖的抗凝血功能

1.1.7海藻多糖的消脂减肥及其它功能

1.2海藻多糖的提取、分离纯化和制备

1.2.1海藻多糖提取技术研究进展

1.2.2海藻多糖分离纯化技术研究进展

1.3海藻多糖的结构分析

1.4小球藻的生物活性及提取纯化

1.5本研究的主要内容及意义

第二章蛋白核小球藻多糖的膜分离提取技术

1材料与方法

2结果与讨论

2.1提取因素与蛋白核小球藻多糖得率的正交试验结果

2.2 TCA浓度对终产品中蛋白核小球藻多糖纯度的影响

2.3膜分离条件的选择

2.4凝胶层析法纯化蛋白核小球藻多糖条件优化

3本章小结

第三章蛋白核小球藻多糖的结构分析

1材料与方法

2结果与讨论

2.1蛋白核小球藻多糖的分子量测定

2.2气相色谱法分析蛋白核小球藻多糖

2.3蛋白核小球藻多糖的红外光谱分析

3本章小结

第四章蛋白核小球藻多糖的增强免疫活性研究

1材料和方法

2结果与讨论

2.1蛋白核小球藻多糖的非特异性免疫功能评价

2.2蛋白核小球藻多糖的细胞免疫功能评价

2.3蛋白核小球藻多糖的体液免疫功能评价

3本章小结

参考文献

攻读硕士学期间发表的论文

致 谢