蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）多糖的制备和In vitro抗肿瘤活性研究

摘要

论文优化了超声波辅助提取蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)多糖的工艺，采用膜分离技术对多糖进行初步分离，根据带电性质和分子量采用DEAE C-52和Sephadex G-100纯化出不同的多糖组分，研究了两个多糖组分CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa的结构及其In vitro抗肿瘤活性。主要研究结果如下： 1．本研究确定的多糖最佳提取条件为：温度68℃，时间55 min，超声波功率200w，料液比1∶20，提取次数2次，多糖的得率为3.52％，纯度为44.44％。在相同条件下，不运用超声波，多糖的得率为1.92％，运用超声波技术使多糖得率增加近1倍。 2．三氯乙酸结合微滤(0.1μm)技术可以使蛋白清除率达到83.30％，显著高于相同条件下用三氯乙酸的51.64％。通过对超滤膜孔径的筛选，确定截留分子量分别为30kDa和1 kDa的膜。优化超滤过程中的最佳工艺参数，分别为操作压力为11 psi，温度40℃，时间1.5 h。DEAE C-52和Sephadex G-100纯化得到2个单一多糖组分CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa。 3．红外光谱解析表明CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa呈现出多糖的特征吸收峰，均为吡喃糖且以β-构型为主。HPLC法测定了CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa的峰值分子量(Mp)分别为69658 Da，109408 Da。气相色谱法分析表明CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa均由D-鼠李糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成，摩尔比分别为：2.21∶1∶2.13∶5.48和3.27∶1.20∶1∶2.11。另外在CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa中均含有一种未知多糖，相对百分含量分别为10.45％和26.71％。CPPS Ⅰa，CPPS Ⅱa对人肺癌细胞A549的In vitro生长抑制作用呈剂量依赖关系，在1 mg/mL时，抑制率分别为68.70％和49.50％。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述-海藻多糖的提取纯化、结构分析及生物活性研究进展

1.1海藻的研究概况

1.2海藻多糖的研究进展

1.2.1海藻多糖的提取、分离、纯化方法

1.2.2海藻多糖的结构分析

1.2.3海藻多糖的生物活性研究

1.3小球藻的研究进展

1.4本论文的主要研究内容

1.5本论文的研究意义

第二章蛋白核小球藻多糖的超声波辅助提取技术研究

2.1材料与方法

2.2结果与讨论

2.2.1脱脂蛋白核小球藻的成分组成

2.2.2时间对小球藻粗多糖得率的影响

2.2.3温度对小球藻多糖得率的影响

2.2.4功率对小球藻多糖得率的影响

2.2.5料液比对小球藻多糖得率的影响

2.2.6提取次数对小球藻多糖得率的影响

2.2.7小球藻多糖提取正交实验结果

2.3本章小结

第三章蛋白核小球藻多糖的膜分离及其纯化技术研究

3.1材料与方法

3.2结果与讨论

3.2.1三氯乙酸浓度对去蛋白效果的影响

3.2.2三氯乙酸结合微滤除蛋白效果

3.2.3超滤膜的选择

3.2.4 30 kDa的膜分离条件选择结果

3.2.5 1 kDa的膜分离条件选择结果

3.2.6两道膜超滤结果

3.2.7 30k CPPS和1k CPPS的DEAE C-52分离结果

3.2.8 CPPS Ⅰ和CPPSⅡ的Sephadex G-100纯化结果

3.2.9 CPPS 1 Sephadex G-100纯化结果

3.2.10小球藻多糖的紫外扫描曲线

3.3本章结论

第四章CPPSⅠa和Ⅱa的结构分析及Invitro抗肿瘤活性研究

4.1材料与方法

4.2结果与讨论

4.2.1 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa的红外光谱分析

4.2.2 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa分子量测定

4.2.3 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱa的单糖组成分析

4.2.4 CPPS Ⅰa和CPPS Ⅱ对A549的In vitro抑制作用

4.3本章小结

全文结论

参考文献

在读期间已发表与录用论文

致谢