猪卵巢发育的组织学观察及磷酸二酯酶3A的表达研究

摘要

卵泡发育是一个以形态变化为特征的生长过程，同时伴随着卵泡功能的分化.原始卵泡一旦启动生长，便是一个连续不断的发育和分化过程，要么变成优势卵泡，使卵子排放与成熟，要么中途闭锁。每个性周期启动生长一组原始卵泡，同时生长启动的多数卵泡将不会达到排卵阶段，而是在发育过程中的不同时期发生凋亡。卵泡发育过程的调节是一个复杂的过程，包括内分泌因素（促性腺激素）和卵巢内调节因子（性激素、生长因子和细胞因子），他们共同调控卵母细胞的生长发育.
　　 PDE3A是卵巢内表达的主要磷酸二酯酶亚型，其在卵巢发育生长过程中能降解cAMP，使cAMP浓度下降，从而下调FSH、LH浓度，达到维持细胞正常功能的作用。此外，PDE3A基因敲除小鼠排出的卵母细胞在体外不能自发减数分裂成熟，一直处于GV期，除非抑制PKA活性，卵母细胞才能继续发育成熟.说明在小鼠卵母细胞中PDE3A通过调控cAMP水平影响PKA活性，从而对调节卵母细胞成熟起重要作用。
　　 本实验采用的实验动物为二花脸母猪，二花脸猪是我国优良地方猪种，属太湖猪中的优秀种群，它以高繁殖性能而著称于世，誉之为“猪中之国宝”、“世界猪种产仔之王”.经国营常熟畜禽良种场纯繁的二花脸猪平均窝产总仔数和成活仔数分别达15.93和14.12头；初情日龄和个体重分别为64天和15千克；子一代杂交母猪繁殖性能的杂交优势特别显著，同时耐粗饲、适应性强、肉质鲜美.故选用二花脸母猪作为实验动物具有一定的代表意义。
　　 本研究取用不同日龄的猪卵巢，通过染色观察不同发育阶段的猪卵巢在组织学上的变化过程，旨在探讨猪卵巢卵泡发育的动态变化特点；并通过测定PDE3A亚型在不同日龄的母猪卵巢组织中的表达，研究PDE3A在调控卵泡发育及成熟过程中的特殊意义，为提高产仔率提供理论基础，从而提高畜群的繁衍速度，增加畜牧业生产的效益。
　　 为了研究母猪卵巢在不同发育阶段的组织学变化规律和探讨磷酸二酯酶3A(PDE3A)在卵巢发生发育和成熟过程中的生物学意义，本研究选二花脸母猪胎90日龄、新生1日龄、生后20、120和180日龄的母猪卵巢，进行组织学观察，并利用RT-PCR检测PDE3AmRNA的表达情况。结果显示，胎90日龄主要由原始卵泡组成；出生1日龄、20日龄、120日龄阶段发育明显，180日龄卵巢内观察到的形态特点与120日龄相似。另外，猪卵巢不同日龄都有PDE3A mRNA和内参基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的表达。经灰度值扫描，统计学分析显示，PDE3A mRNA相对含量差异有显著性(P＜0.01)。各组间两两比较结果（见图5），胎90日龄，出生1日龄卵巢中PDE3A的mRNA的相对含量与20日龄差异有显著性(P＜0.01)，显著减少；出生20日龄与120日龄差异也有显著性（P＜0.01），表达量却显著回升.而胎90日龄与出生1日龄，120日龄与180日龄之间比较，表达量均有差异，但无统计学意义。PDE3A mRNA表达水平在出生20日龄时相比较其他各个阶段显著减少，这可能提示PDE3A在从原始卵泡募集到初级卵泡过程中具有生物学作用。

目录

文摘

英文文摘

缩略词(ABBREVIATION)

前言

文献综述

第一章 太湖猪的生殖生物学特性

1 品种形成

2 产地分布

3 生物学特性

4 生殖特性

5 肥育性能

6 太湖猪的利用现状

7 总结

第二章 PDE3A在卵巢卵泡发育中的作用

1 PDE3A在卵巢发育中的作用

2 PDE4D的调节生长和发育作用

3 PDE5在卵巢卵泡发育中的作用

4 小结

参考文献

实验研究

第三章 猪卵巢发育的组织学观察

引言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 总结

参考文献

第四章 猪卵巢发育中PDE3A的表达研究

1 引言

2 材料与方法

3 结果

4．讨论

参考文献

全文结论

创新点

致谢

作者简介

附录 主要溶液的配制