转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响

摘要

本研究用大鼠动物模型,探讨转人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)基因的山羊乳对动物生长、代谢、部分免疫指标及肠道组织形态的影响,以评价转hLF基因山羊乳的安全性。
　　 1重组山羊乳中乳铁蛋白的检测
　　 随机选取泌乳期的转hLF基因波尔山羊和普通波尔山羊各六只,分别于产后3d、7d、14d、28d采集乳样。乳样在4℃,3500rpm离心10min,除去乳脂；用考马斯亮蓝染料结合分析法-Bradford法测定脱脂乳中总蛋白质浓度,SDS-PAGE比较两种乳中蛋白质组分的差异,Western blot分析两种乳中乳铁蛋白(human,LF)的表达。结果表明:LF在泌乳初期高表达,且不同泌乳阶段转hLF基因的山羊乳中LF含量均高于普通山羊乳。
　　 2转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠代谢机能的影响
　　 30只清洁级SD大鼠,雌、雄各半,随机分为3组,转基因乳组每天两次灌喂转hLF基因山羊乳1mL/100g体重(蛋白浓度0.93g·mL-1),普通乳组同一时间按上述剂量灌喂普通山羊乳(蛋白浓度0.93g·mL-1),生理盐水组灌喂灭菌生理盐水；自由采食、饮水,连续15天；颈部采血致死,收集血清.利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶终点比色法、赖氏法、脲酶法、除蛋白法、CE-COD-POD比色法等分别测定大鼠血清中血糖(Blood glucose,BG)、谷草转氨酶(Glutamic-oxalacetic transaminase,GOT)及谷丙转氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、尿素氮(Serum urea nitrogea,SUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)含量或活性；放射性免疫分析法检测大鼠血清中胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon,Glu)、三碘甲状腺素(Triiodothyroxine,T3)、甲状腺素(Thyroxin,T4)水平.结果显示:灌喂转hLF基因的山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,其中与生理盐水组相比P<0.01,与普通乳组比P<0.05,而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著；灌喂转基因或普通山羊乳对其他表观及生化指标均无明显影响(P>0.05).试验结果表明:短期灌喂转hLF基因的山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响。
　　 3转人乳铁蛋白基因的山羊乳对大鼠肠道及部分免疫指标的影响
　　 放射免疫分析法检测大鼠十二指肠粘膜中分泌性免疫球蛋白A(Secreting typeImmunoglolbulin A,SIgA)及血清中白介素-2(Interleukin-2,IL-2)水平,H.E染色法观察大鼠十二指肠显微结构,并统计肠粘膜长度；试验结果显示:转hLF基因的山羊乳对雌、雄大鼠肠粘膜中的SIgA及血清中IL-2水平不产生显著影响,但是能够促进大鼠肠粘膜生长.研究结果表明,转hLF基因的山羊乳对大鼠的部分重要免疫指标没有负影响,但能通过促进肠粘膜生长,增加大鼠对营养物质的消化、吸收能力。