声明
摘要
第一章、文献综述
第一节、铜污染对环境造成的影响及治理方法
1．铜污染现状及危害
2．铜污染的治理方法
第二节、影响植物提取修复效率的因素
1．修复植物的选择
2．根际环境因素及重金属形态
第三节、微生物在植物-微生物联合修复中的作用
1．微生物对重金属活性的影响
2．微生物对植物生长的影响
第四节、植物中的一氧化氮(NO)
1．植物产生NO的机制
2．NO对植物生长发育的调节作用
3．NO与植物抗逆境及胁迫
4．NO和植物激素之间的关系
第五节、细菌中NO的产生
第六节、细菌的铜抗性机制
1．大肠杆菌(Escherichia coli)的cut和pco系统
2．海氏肠球菌(Enterococcus hirae)的cop系统
3．丁香假单胞菌(Pseudomonas syringe)的cop系统
第七节、立题依据及研究意义
第二章、菌株的分离筛选及待构建的出发菌株的确定
1．材料
1．1 菌株及来源
1．2 培养基和试剂
2．方法
2．1 菌株的分离
2．2 菌株鉴定
2．3 菌株产NO能力的检测
2．4 菌株对铜的抗性的测定
2．5 质粒提取
2．6 质粒消除
2．7 菌株对抗生素的抗性测定
3．结果与分析
3．1 菌株的分离与筛选
3．2 菌株鉴定
3．3 菌株产NO能力的检测
3．4 菌株对铜的抗性的测定
3．5 菌株自身携带质粒的检测
3．6 菌株自身所携带质粒的消除
3．7 菌株的抗生素抗性
3．8 实验室保存的部分假单胞菌的铜及庆大霉素抗性
4．讨论
4．1 出发菌株的选择
4．2 构建基因工程菌株所用的基因元件的选择
5．本章小结
第三章、基因工程菌株的构建及其生物学特性研究
1 材料
1．1 菌株与质粒
1．2 培养基和试剂
2．方法
2．1 基因工程菌株的构建
2．2 基因工程菌株及出发菌株的生物学特性研究
3．结果与分析
3．1 基因工程菌株的构建
3．2 出发菌株及基因工程菌株的生物学特性研究
4．讨论
4．1 nir基因的克隆
4．2 copABCDRS的克隆
5．本章小结
第四章、基因工程菌株中gfp的表达及其植物促生特性的研究
1．材料
1．1 供试菌株
1．2 供试植物
1．3 培养基和试剂
2．方法
2．1 菌株中表达的绿色荧光蛋白(GFP)的检测
2．2 杂交狼尾草砂培试验
3．结果与分析
3．1 不同铜浓度下P-GFP融合子的表达
3．2 人工气候条件下(光照培养箱中)基因工程菌株S3-BCPN对杂交狼尾草生长的影响
3．3 半人工气候条件下(牌楼温室中)基因工程菌株E2e-BCPN对杂交狼尾草生长的影响
4．讨论
5．本章小结
全文总结
研究展望
本文的创新之处
参考文献
附录 培养基及主要试剂配方
致谢
