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摘要
第一章 嗜水气单胞菌检测技术研究进展
1 嗜水气单胞菌概况
1.1 嗜水气单胞菌生物学特性
1.2 嗜水气单胞菌血清学分型
1.3 嗜水气单胞菌致病因子
1.4 嗜水气单胞菌感染流行病学及病症
2 嗜水气单胞菌检测方法
2.1 常规生化鉴定方法
2.2 选择性培养基鉴定
2.3 分子生物学检测方法
2.4 免疫学技术
2.5 其他方法
3 结语
参考文献
第二章 单链抗体的制备技术及应用发展
1 抗体的分子结构
2 单链抗体的结构
3 单链抗体的特点和改造类型
3.1 单链抗体的特点
3.2 单链抗体的改造类型
4 单链抗体的基因来源
5 单链抗体的表达系统
5.1 原核表达系统
5.2 真核表达系统
6 单链抗体在动物疾病研究中的应用
6.1 应用于靶向载体
6.2 应用于抑制病毒复制
6.3 应用于病原菌检测
6.4 应用于体内寄生虫的防治
7 单链抗体技术发展存在的问题
参考文献
第三章 鲫鱼IgM单链抗体融合基因的构建和表达
1 实验材料
1.1 菌种与载体
1.2 细胞株
1.3 主要试剂
1.4 主要仪器设备
2 实验方法
2.1 杂交瘤细胞株的复苏
2.2 杂交瘤细胞的亚克隆
2.3 杂交瘤细胞总RNA的提取
2.4 反转录合成cDNA
2.5 可变区基因的克隆及鉴定
2.6 单链抗体基因(F3a-scFv)的构建
2.7 pET 32a-F3a-scFv重组表达载体的构建
2.8 pET32a-F3a-scFv融合蛋白的原核表达
2.9 F3a-scFv生物学活性分析
2.10 F3a-scFv酶标抗体的制备
3 结果
3.1 杂交瘤细胞的亚克隆
3.2 杂交瘤细胞总RNA的提取与反转录合成cDNA
3.3 可变区基因VL、VH的扩增
3.4 重组质粒pMD 19T/X的筛选(X为克隆的目的片段)
3.5 可变区基因的测序结果
3.6 单链抗体基(F3a-scFv)的构建
3.7 pET 32a-F3a-scFv重组表达载体的构建
3.8 pET 32a-F3a-scFv融合蛋白的诱导表达
3.9 F3a-scFv抗原结合活性
3.10 F3a-scFv酶标抗体的制备
4 讨论
4.1 scFv基因的构建
4.2 scFv的表达
4.3 scFv基因序列分析
4.4 scFv蛋白的纯化、复性和浓缩
4.5 scFv活性的测定
参考文献
第四章 嗜水气单胞菌抗体间接ELISA检测方法的建立
1 实验材料
1.1 实验动物及菌株
1.2 主要试剂及实验仪器
2 实验方法
2.1 全菌抗原的制备
2.2 血清的制备
2.3 间接ELISA实验操作步骤
2.4 间接ELISA最佳反应条件的选择
2.5 敏感性试验
2.6 重复性试验
2.7 不同免疫及感染时期鲫鱼IgM抗体水平的检测
3 结果
3.1 间接ELISA最佳反应条件的选择
3.2 敏感性试验
3.3 重复性试验
3.4 不同免疫及感染时期鲫鱼血清抗体水平的检测
4 讨论
参考文献
全文总结
致谢