转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测体系的建立

摘要

转基因大豆MON8978是美国孟山都公司研发的抗草甘膦大豆品种，中国在2008年批准其作为加工原料进口。本文旨在建立转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测体系，为转基因大豆MON89788及其制品的安全监管提供技术和理论支持。本研究主要包括以下两部分:
　　实验一旨在优选出合适的大豆及主要豆制品DNA提取方法，为转基因大豆PCR检测中DNA提取方法的比较评估的提供一套参考体系。实验以大豆、豆奶粉、豆腐干、大豆蛋白和豆粕为材料，选择了CTAB法、SDS法和Tiangen离心柱试剂盒法，并根据实际检测需要对其进行了改动，3种方法提取的DNA通过紫外分光光度法和实时荧光PCR法检测DNA质量，选出最佳的DNA提取方法。结果显示:与SDS法和Tiangen离心柱试剂盒法相比，CTAB法提取的大豆及主要豆制品的DNA质量较高，更能够保证转基因成分PCR检测结果的准确性，并且成本低、操作简便。因此，对于大豆及豆奶粉、豆腐干、大豆蛋白、豆粕等豆制品，CTAB法是3种方法中最合适的DNA提取方法，适用于转基因检测中DNA模板的制备。
　　实验二旨在建立一种转基因大豆MON89788品系特异性实时荧光PCR检测方法，为转基因大豆MON89788及其制品的快速检测提供技术和理论支持。实验构建一种新型的质粒标准分子pUC19-LM5，其包含转基因大豆MON89788品系特异性序列和大豆内标准基因lectin。以质粒标准分子pUC19-LM5为阳性标准品建立转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法，并对建立的实时荧光PCR方法进行方法学评价。结果显示:建立的方法高度特异于转基因大豆MON89788检测;2个目标片段的检测极限(LOD)为4拷贝质粒标准分子DNA，定量极限(LOQ)为10拷贝质粒标准分子DNA;构建的标准曲线反应效率大于95％，相关系数大于0.99;3个盲样的定量分析中，测量值与设定值间的偏差(Bias)在-14.81％～9.81％之间，测量值的相对标准偏差(RSD)在2.72％～6.28％之间。此外，建立的实时荧光PCR检测方法在实际检测中得到了验证。因此，基于质粒标准分子pUC19-LM5为阳性标准品建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法适用于转基因大豆MON89788及其制品的检测。

目录

声明

摘要

缩略词中英文对照表

前言

文献综述

1 转基因大豆研究概况

1．1 抗除草剂转基因大豆

1．2 抗病虫性转基因大豆

1．3 抗逆性转基因大豆

1．4 品质改良转基因大豆

2 转基因大豆检测方法研究进展

2．1 转基因大豆检测方法概述

2．2 转基因大豆及其制品PCR检测的策略

2．3 转基因大豆及其制品PCR检测的核酸提取方法

2．4 TaqMan实时荧光PCR检测方法

2．5 转基因大豆及其制品PCR检测标准物质的研究

3 本研究的目的和意义

参考文献

试验研究

第一章 大豆及主要豆制品DNA提取方法的比较研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 本章小结

参考文献

第二章 转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法的建立

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 本章小结

参考文献

全文总结

致谢

攻读硕士学位期间论文发表情况