木犀草素对AngII诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的抑制作用及其机制研究

摘要

目的：本实验旨在观察木犀草素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激内皮细胞增殖与迁移的抑制作用，并对其作用机制进行初步探讨，研究木犀草素抗动脉粥样硬化的机理，为今后Luteolin作为预防和治疗动脉粥样硬化性疾病提供理论和实验依据。
　　 方法：1．实验所用的内皮细胞是人脐静脉内皮细胞株(HUV-EC-C)购自ATCC。2．本实验用AngⅡ对内皮细胞进行刺激，用Luteolin作为干预因素，观察其对抗AngⅡ诱导内皮细胞增殖和迁移的作用，并研究其相关信号通路。3．实验分组为(1)正常对照组；(2)AngⅡ组；(3)Luteolin组；(4)AngⅡ+Luteolin浓度梯度组(12.5μM、25μM、50μM)。4．噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖情况；Transwell小室测定细胞迁移情况；免疫印迹实验（Western blot）测定p-Src，p-Akt(308)，p-Akt(473)激酶活化情况。
　　 结果：1.MTT结果显示AngⅡ能明显促进内皮细胞的增殖。AngⅡ促进内皮细胞增殖的作用能被Luteolin所抑制，并且Luteolin呈浓度依赖性抑制内皮细胞增殖。2.Transwell小室结果显示AngⅡ作用12小时可促进内皮细胞迁移，Luteolin能明显抑制内皮细胞迁移，随着Luteolin浓度增加，细胞迁移数明显减少，呈剂量依赖性。3.Western blot结果显示Luteolin能明显抑制内皮细胞中p-Src活化水平并呈浓度和时间依赖性。4.Western blot结果显示p-Akt在AngⅡ刺激后30min活化水平最高，其后降低至本底水平，Luteolin可明显降低Akt磷酸化水平并呈浓度和时间依赖性。
　　 结论：1.Luteolin可显著抑制AngⅡ诱导的内皮细胞增殖和迁移，并呈剂量依赖性。2.Luteolin能明显抑制内皮细胞中p-Src活化水平，提示其可能通过抑制Src的活化阻断ROS的产生，从而发挥抗氧化作用。3.Luteolin能降低内皮细胞p-Akt的蛋白表达水平，发挥作用有可能是依赖于Akt信号通路而完成的。