碘促进血管内皮细胞增殖机制的研究

摘要

目的：研究碘(iodine)促进血管内皮细胞(vascular endothelial cells，VEC)增殖可能的分子机制。
　　方法：人脐静脉血管内皮细胞株EA.hy926常规培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中，在37℃、5％CO2及饱和湿度培养箱中培养。
　　第一部分丝裂原活化蛋白激酶激酶1(Mitogen-activated Protein Kinase Kinase1，MEK1)抑制剂PD98059对碘离子(Iodine ion，I-)浓度为300μg/L环境中的VEC增殖影响
　　实验分为正常对照组、PD98059组、PD98059+KI组、KI组，应用CCK-8试剂测定细胞增殖情况。
　　第二部分不同浓度I-对EA.hy926细胞表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的影响
　　1.免疫印迹法测定不同浓度I-刺激后EA.hy926细胞的VEGF表达水平；2.半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)测定不同浓度I-刺激后EA.hy926细胞VEGF mRNA的表达变化；3.统计学分析。
　　结果：第一部分MEK1抑制剂PD98059对300μg/L I-环境中培养的VEC增殖的影响与正常对照组相比，I-组VEC的增殖率显著增高(P<0.01)，提示300μg/L的I-能够刺激VEC增殖；MEK1抑制剂组细胞增殖率显著降低(P<0.01)，提示通过抑制MEK1激活能够抑制VEC增殖。MEK1抑制剂+KI组与KI组相比细胞增殖率显著降低(P<0.01)，提示在300μg/L I-环境中抑制MEK1能够抑制VEC增殖。MEK1抑制剂+KI组与MEK1抑制剂组细胞增殖率无明显差异(p>0.05)。这些结果表明：300μg/L I-能够刺激VEC增殖，在含I-环境下抑制MEK能够抑制VEC增殖。第二部分不同浓度I-刺激对VEC表达VEGF的影响1.免疫印迹检测结果显示不同浓度I-刺激EA.hy926细胞24h后，与正常对照绀比较，实验组VEGF蛋白表达无上调(P>0.05)，各实验组间VEGF蛋白表达无差异(P>0.05)2.RT-PCR检测结果显示不同浓度I-刺激EA.hy926细胞24h后，与正常对照组比较，实验组VEGFmRNA表达无上调(P>0.05)，各实验组间VEGFmRNA表达无差异(P>0.05)。
　　结论：300μg/L的I-能够促进VEC增殖；MEK1抑制剂能够抑制I-对VEC增殖的促进作用；I-促进VEC增殖与ERK信号通路激活有关；高浓度I-不促进VEC表达合成VEGF。