转GL融合蛋白基因大米的急性与遗传毒性及致畸试验研究

摘要

水稻在我国粮食生产和消费中占有重要地位,也是世界上最重要的粮食作物之一。赖氨酸是水稻的第一限制性氨基酸,通过转基因技术提高水稻种子中赖氨酸含量能改善水稻的营养品质。毒理学安全评价是转基因产品食用安全性评价中的重要部分。目前对品质改良型转基因大米的毒理安全性评价报道相对较少,转GL融合蛋白基因大米(本文简称其为转GL大米)在哺乳动物中的毒理安全性研究尚未见报道。
　　 本论文以转GL大米为试验对象,参照《转基因植物及其产品食用安全性评价导则》和《食品安全性评价程序和方法》等标准,对转GL大米进行急性毒性试验、遗传毒性试验和大鼠致畸试验,评价转GL大米是否具有急性毒性、遗传毒性和致畸性。论文的主要研究内容如下:
　　 1.对转GL大米进行急性毒性试验,观测小鼠的表观行为、血常规、脏器系数等指标。试验结果表明,转GL大米对雌雄小鼠体重均无显著影响；各组小鼠脏器系数和血常规指标无生物学意义上的差异；对主要脏器进行病理学观察,未见异常病变；转GL大米LD50>21.5g／kg·bw,按照食品毒理分级属于无毒,即转GL大米未对小鼠表现出急性毒性作用。
　　 2.对转GL大米进行骨髓细胞微核试验,评价其是否对小鼠体细胞产生遗传毒性。试验结果表明,转GL大米组小鼠骨髓细胞微核率与亲本大米组相比无显著差异,即转GL大米未对体细胞产生遗传毒性。
　　 3.对转GL大米进行小鼠精子畸形试验,评价其是否对小鼠生殖细胞产生致畸毒性。试验结果表明,转GL大米组小鼠精子畸形率与亲本大米组相比无显著差异,即转GL,大米未对小鼠生殖细胞产生致畸毒性。
　　 4.对转GL大米进行Ames试验,评价其是否具有致突变性。试验结果表明,添加量为40～5000μg／皿时,转GL大米未表现出对鼠伤寒沙门氏菌的诱变作用,即未引起基因突变。
　　 5.对转GL大米进行彷徨试验,进一步评价转GL大米是否具有微弱的致突变性。试验结果表明,添加量为16-2000μg／皿时,转GL大米也未表现出对鼠伤寒沙门氏菌的诱变作用,即未引起基因突变。
　　 6.分别用添加70％转GL大米或70％亲本大米的饲料饲喂大鼠,另设阴性对照组和阳性对照组。观察和测定孕鼠体重增长、孕鼠饲料消耗量、胚胎形成、胎鼠发育和胎鼠畸形率等指标,评价转GL大米是否对孕鼠及胎鼠产生致畸作用。试验结果表明,转GL大米组、阴性对照组及亲本大米组各指标均无显著差异,转GL大米未对大鼠产生母体毒性、胚胎毒性及胎鼠致畸作用。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1.1 第二代转基因水稻研究概况

1.1.1 蛋白质/氨基酸的改良

1.1.2 维生素的改良

1.1.3 淀粉品质的改良

1.1.4 微量元素的改良

1.1.5 其他性状的改良

1.2 转基因作物潜在的食用安全性问题

1.2.1 潜在的毒性

1.2.2 致敏性

1.2.3 抗药性

1.3 转基因作物食用安全性评价的主要原则和方法

1.3.1 食用安全性评价原则

1.3.2 食用安全性评价方法

1.4 研究目的和意义

1.5 主要研究内容

第二章 转GL大米的急性毒性试验研究

2.1 引言

2.2 试验材料和仪器设备

2.2.1 试验材料

2.2.2 仪器与设备

2.3 试验方法

2.3.1 试验分组

2.3.2 小鼠表观行为与体症观察

2.3.3 血常规的测定

2.3.4 脏器系数的测定

2.3.5 组织病理学检查

2.3.6 数据处理

2.4 试验结果与分析

2.4.1 小鼠表观行为与体症观察结果

2.4.2 LD50的确定

2.4.3 血常规测定结果

2.4.4 小鼠体重变化

2.4.5 脏器系数测定结果

2.4.6 组织病理学检查结果

2.5 本章小结

第三章 转GL大米的遗传毒性试验研究

3.1 引言

3.2 试验材料和仪器设备

3.2.1 试验材料

3.2.2 仪器与设备

3.3 试验方法

3.3.1 小鼠骨髓细胞微核试验

3.3.2 小鼠精子畸形试验

3.3.3 Ames试验

3.3.4 彷徨试验

3.3.5 数据处理

3.4 结果与分析

3.4.1 小鼠骨髓细胞微核率测定结果

3.4.2 小鼠精子畸形率测定结果

3.4.3 Ames回复突变菌落数及诱变指数测定结果

3.4.4 彷徨试验阳性孔数计数

3.5 本章小结

第四章 转GL大米的致畸性试验研究

4.1 引言

4.2 材料和仪器

4.2.1 试验材料

4.2.2 仪器与设备

4.3 试验方法

4.3.1 试验试验设计及处理

4.3.2 孕鼠生长情况考察

4.3.3 胚胎形成情况考察

4.3.4 胎鼠发育情况考察

4.3.5 胎鼠畸形情况考察

4.3.6 数据处理

4.4 结果与分析

4.4.1 转GL大米对孕鼠生长的影响

4.4.2 转GL大米对胚胎形成的影响

4.4.3 转GL大米对胎鼠发育的影响

4.4.4 转GL大米对胎鼠畸形率的影响

4.5 本章小结

第五章 主要结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

致谢

硕士期间发表文章