SOD活性的毛细管电泳测定及与酸枣仁皂苷的抗氧化协同作用

摘要

酸枣仁作为食药同源的传统天然产物,在我国具有悠久的使用历史。对酸枣仁作用的大量研究发现其对中枢神经系统、心血管系统及机体免疫功能等都具有广泛的影响,能有效发挥镇静催眠、保护心肌细胞、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等多种功效,在临床上具有广阔的应用前景。而酸枣仁中最主要的有效成分是酸枣仁皂苷A和B。对酸枣仁皂苷进行提取分离对于更有效地开发利用此资源具有重要意义。超氧化物歧化酶(SOD)是体内的一种可以消除超氧阴离子自由基的抗氧化酶,具有抗氧化,抗衰老,抗辐射,提高机体免疫力,减轻肿瘤患者在放疗、化疗过程中的严重毒副作用等生理功能。建立SOD活性测定新方法,在此基础上研究酸枣仁皂苷与SOD抗氧化协同作用,将为SOD的研究应用及阐明酸枣仁的药理作用机制提供理论基础和技术支持。基于以上目的,本论文主要做了以下几方面的研究:
　　 1、建立了超声回流法提取酸枣仁皂苷的新工艺,通过单因素试验和正交试验详细考察了提取方法的影响因素,确定酸枣仁皂苷的最佳提取工艺为:在超声功率为1kW条件下,超声时间140min、乙醇体积分数75%、料液比1:12。在此条件下脱脂酸枣仁中酸枣仁皂苷平均得率为0.77‰,RSD=0.61%。与索氏法和超声法相比,皂苷得率有较大提高。
　　 2、建立了SOD活性的毛细管区带电泳检测新方法。在优化的电泳条件下,得到SOD在0.1～0.5mg/L范围内线性关系良好,IC50=0.27mg/L,精密度为1.97%;血清样品在20-100μL范围内线性关系良好,血清的IC50=76.4μL,活性为26.18U/mL,加标回收率为97.6%～99.2%。
　　 3、首次建立了通过评价酸枣仁皂苷与SOD独立抗氧化作用之和与共同抗氧化作用的差异判断其是否具有抗氧化协同作用的新方法。利用建立的SOD活性的测定方法,在血清介质存在条件下,测定了酸枣仁皂苷体外清除自由基的活性,评价了酸枣仁皂苷与SOD的抗氧化协同作用。试验结果表明酸枣仁皂苷A和B均具有一定的清除O2的活性,且均与SOD具有抗氧化协同作用。酸枣仁皂苷A和B与SOD的抗氧化协同作用具有一定的量效关系,但量效关系不显著。