TH9、TH17及TREG细胞在鼻息肉发病中的研究与探讨

摘要

目的:
　　鼻息肉是耳鼻咽喉科常见病，是一种鼻腔、鼻窦持续性慢性炎症性疾病，以鼻腔中形成透明葡萄样物为特点，术后具有较高的复发性，目前其发病机制尚无明确定论，近些年Th9、TH17及Treg细胞是各种疾病的研究热点，这为鼻息肉的发病机制提供了新的研究方向，本研究通过检测鼻息肉患者外周血Th9、Th17及Treg细胞的表达，初步探讨Th9、Th17及Treg细胞对鼻息肉的形成的影响及这三种细胞在鼻息肉发病机制中是否存在相关性。
　　方法:
　　所有实验对象均来自江苏大学附属人民医院耳鼻咽喉。头颈外科住院患者，除慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者46例（鼻息肉组）外，另收22例单纯鼻出血或鼻中隔偏曲患者外周静脉血作为对照组。收集所有参与本研究的患者外周静脉血，提取单个核细胞，分两部分处理:一部分进行细胞染色后，采用流式细胞术检测两组患者外周静脉血中Th9、Th17及Treg细胞的表达率。另一部分加Trizol充分溶解后，保存于-80摄氏度，整批提取RNA，逆转录，最后以用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测两组患者外周血中Th9，Th17及Treg细胞相关转录因子IL-9mRNA，PU.1，IRF-4，RoRc及Foxp3的相对表达量。采用SPSS16.0统计分析软件对外周静脉血中Th9、Th17和Treg细胞及三种细胞的相应转录因子在鼻息肉组和对照组的差异性进行统计处理，并对Th9与Th17细胞及Th17与Treg细胞在鼻息肉组中的相关性进行分析。
　　结果:
　　(1)鼻息肉患者外周静脉血中Th9、Th17细胞的表达率(1.29％±0.18％，4.03±0.69％)明显高于对照组外周静脉血中Th9、Th17细胞的表达率(0.45％±0.14％，1.35％±0.26％，P＜0.05)，而鼻息肉患者外周静脉血中的Treg细胞的表达率(2.98％±0.13％)明显低于对照组外周血中Treg细胞的表达率(5.44％±0.57％，P＜0.05)，差异均有统计学意义。
　　(2)鼻息肉患者组的转录因子IL-9mRNA，PU.1，IRF-4，RoRc的相对表达量明显高于对照组，而Foxp3的表达量明显低于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
　　(3)鼻息肉患者外周血静脉中Th9与Th17细胞之间无明显相关性(P＞0.05)，Th17与Treg细胞之间呈负相关(r=-0.549，P＜0.05)。
　　结论:
　　外周静脉血中高水平的Th9和Th17细胞对鼻息肉的形成有一定促进作用，而Treg细胞的较低表达可能进一步加剧了鼻息肉的发生，且在鼻息肉的发病机制中存在Th17/Treg失衡，Th17/Treg细胞平衡在鼻息肉的发病机制中起着重要免疫调节作用。

目录

声明

摘要

中英文缩写一览表

第一章 前言

1．1 鼻息肉

1．2 Th9细胞

1．3 Th17细胞

1．4 Treg细胞

1．5 Th9与Th17细胞的关系

1．6 Th17和Treg细胞的关系

1．7 本论文研究的设想、方法与技术、实验方案和设计、结果和意义研究设想

第二章 实验材料与方法

2．1 标本的采集

2．1．1 实验对象

2．1．2 纳入标准

2．2 实验材料

2．2．1 实验主要试剂及配制

2．2．2 实验主要设备及耗材

2．3 实验方法

2．3．1 临床标本的收集

2．3．2 单个核细胞(PBMC)的提取

2．3．3 流式细胞术

2．3．4 实时定量PCR(RT-PCR)

2．4 统计学方法

第三章 实验结果

3．1 流式细胞术检测三种细胞后的结果

3．1．1 Th9细胞的百分比

3．1．2 Th17细胞的百分比

3．1．3 Treg细胞的酉分比

3．1．4 Th9细胞与Th17细胞的相关性分析

3．1．5 Th17细胞与Treg细胞的相关性分析

3．2 实时定量PCR

3．2．1 外周血中IL-9mRNA的表达量

3．2．2 外周血中PU．1 mRNA的表达量

3．2．3 外周血中IRF-4 mRNA的表达量

3．2．4 外周血中RORc mRNA的表达量

3．2．5 外周血中Foxp3的表达量

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

硕士攻读期间发表的文章

致谢