干燥对白果中银杏酚酸的影响及银杏酚与顺铂联合应用对肿瘤作用效果的观察

摘要

银杏酸和银杏酚为烷基酚酸类小分子化合物，存在于银杏（Ginkgo biloba L.）的叶、果和外种皮中，其中银杏酸被认为是导致白果过敏的主要物质，因此在白果加工过程中，降低银杏酚酸类化合物含量，以达到食品安全的要求。与此同时，该类化合物又表现出突出的杀菌、杀虫和抗肿瘤活性，在食品药品和植物农药的开发方面有十分巨大的应用潜力。
　　本文首先从白果干燥处理角度出发，研究不同干燥方法对白果中银杏酸、银杏酚含量的影响。其次，研究银杏酸降解产物银杏酚对顺铂治疗荷肝癌小鼠疗效的影响。并初步探索银杏酚抗肿瘤的作用机理。研究的主要结论如下：
　　1、采用微波和红外对白果进行干燥，以60℃烘干为参照，对比不同干燥方法对其中银杏酸、银杏酚含量的影响。结果表明：与60℃烘干相比，白果经700W微波、80℃红外干燥处理后银杏酸、银杏酚含量稍有降低。在白果浆中加一定量Na2CO3静置2~12 h，再于同样条件干燥，发现加碱处理后银杏酸、银杏酚的含量明显降低，其降低率与加碱处理时间无依赖关系；与80℃红外加碱干燥相比，700W微波加碱干燥处理后白果中银杏酸含量降低了39％，银杏酚含量降低了23.3%。
　　2、银杏酚体外对HepG2、SW480细胞迁移、侵袭的作用。采用MTT法，检测银杏酚及其与顺铂联用对HepG2、SW480、HGC三种细胞存活率的影响；采用Transwell小室实验，探讨银杏酚对HepG2、SW480细胞迁移、侵袭的作用；采用Western blot观察MMP-7、RhoA和P-AKT的表达情况。结果表明，在0～80μg/mL时，银杏酚体外对HepG2、SW480、HGC的增殖具有很好的抑制作用。当顺铂与银杏酚按照1:2、1:4、1:8的浓度比例联用时，表现为协同作用，联合指数分别为1.23、1.19、1.16。分别用20、40、80μg/mL银杏酚处理HepG2、SW480细胞24h后，两种细胞的迁移、侵袭能力随着银杏酚浓度的增加而逐渐减弱。不同浓度银杏酚处理HepG2、SW48024h后观察到，随着银杏酚浓度的增加，MMP-7和RhoA、P-AKT的表达量逐渐降低。
　　3、银杏酚与顺铂联用对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。昆明小鼠接种H22肝癌细胞构造实体瘤模型。分别以7.5 mg/kg顺铂、1/2顺铂（3.75 mg/kg）、40 mg/kg银杏酚，及1/2顺铂（3.75 mg/kg）联合银杏酚10 mg/kg（低）或20 mg/kg（中）或40 mg/kg（高）隔天腹腔给药10次，取血后处死。结果表明40 mg/kg银杏酚联合1/2顺铂（3.75 mg/kg）治疗荷H22小鼠的抑瘤效果与7.5 mg/kg顺铂组接近且明显优于3.75 mg/kg顺铂组，降低顺铂的毒性，避免了小鼠体重减轻。计算Q值=1.46>1.15，说明40 mg/kg银杏酚能提高3.75 mg/kg顺铂的抑瘤能力；与3.75 mg/kg顺铂组相比，1/2顺铂（3.75 mg/kg）与40 mg/kg银杏酚的联用，提高了小鼠的胸腺、脾脏指数，40 mg/kg银杏酚对顺铂具有减毒增效的作用。
　　4、银杏酚对顺铂化疗Heps肝癌小鼠血清中IFN-γ、IL-2、TNF-α水平的影响。昆明小鼠接种Heps肿瘤细胞构造移植瘤模型。分别以顺铂（3.75 mg/kg）、银杏酚组（40 mg/kg）、顺铂（3.75 mg/kg）+20 mg/kg低剂量银杏酚、顺铂（3.75 mg/kg）+40 mg/kg高剂量银杏酚，隔天腹腔给药10次，取血后处死。结果显示40 mg/kg银杏酚与顺铂联用不仅能提高小鼠的胸腺指数、脾脏指数和肝脏指数，还能显著升高血清中IFN-γ、IL-2、TNF-α的水平，Q值=1.16﹥1.15，说明40 mg/kg银杏酚能提高3.75 mg/kg顺铂的抑瘤能力。40 mg/kg银杏酚对顺铂具有增效作用，可能通过拮抗顺铂对化疗小鼠免疫功能的抑制作用，增强其抗肿瘤能力。