动物性食品中大环内酯类抗生素残留的HPLC分析

摘要

大环内酯类抗生素(macrolideantibiotics,MALs)是一类化学结构和抗菌作用相近的碱性抗生素群，属于中谱抗生素。MALs广泛用于畜禽细菌性和支原体感染的化学治疗，同时也是重要的生长促进剂，在动物药品和饲料添加物中占有重要位置。然而当过量或不当使用此类抗生素时，会造成兽药残留，MALs通过食物链进入人体，将对人类健康构成严重危害。MALs在动物性食品中的残留检测和监控与其他兽药一样已受到许多国家包括我国政府的高度重视，目前欧盟及我国均对MALs提出了限量要求。 本文以螺旋霉素(SPI)、吉他霉素(KIT)、替米卡星(TILM)、泰乐菌素(TYL)、红霉素(ERM)、竹桃霉素(OLE)为目标检测物，针对目前肉类食品中大环内酯类抗生素残留检测的研究现状，从以下几方面展开研究工作： 1)建立了一种反相高效液相色谱法对六种大环内酯类抗生素的分离检测方法。通过考察色谱柱、柱温、流动相组成等因素对六种大环内酯的保留时间及分离的影响，优化了各色谱条件。此方法采用二极管阵列检测器，分别在204nm，232nm，287nm波长下进行检测。SPI、KIT、TYL、TILM四种物质的检出限为0.016-0.041mg/kg，定量限0.053-0.135mg/kg，线性范围较好，灵敏度高，结果可靠。 2)研究了基质较复杂的肉类食品中大环内酯类抗生素的提取、净化、富集等样品处理方法。对提取溶剂、提取方法、固相萃取柱、淋洗液及洗脱液等条件进行了研究优化。最终选择以甲醇为提取溶剂，用BondElutSCX(500mg,3mL)固相萃取柱对提取液进行净化。猪肝、鸡肉样品处理后使用高效液相色谱检测，对样品的加标回收实验结果良好，并通过液相色谱-电喷雾质谱进行确证分析。 3)建立了高效液相色谱-电喷雾质谱同时检测肉类食品中六种大环内酯类抗生素的方法。以罗红霉素为内标，采用电喷雾离子源ESI，正离子扫描模式，选择M+H为监测离子，流动相为甲酸-乙腈梯度系统。方法检出限低，较液相色谱灵敏度更高。应用本方法对鸡肝、牛肉样品进行加标回收实验，鸡肝加标样品的回收率为73.5％-92.3％，相对标准偏差小于8.2％；牛肉加标样品的回收率为78.5％-94.2％，相对标准偏差小于9.1％。并用建立的方法测定了市场上销售的多批鸡肝、鸡肉、牛肉样品。此方法的定量限为0.005-0.030mg/kg，完全可以满足国内外有关法规的要求，可为肉类样品中大环内酯类抗生素残留的监督检验和残留监控提供技术支持。 通过上述研究，系统建立了大环内酯的高效液相色谱法、液相色谱-电喷雾质谱分离检测方法，及相应的动物性食品样品预处理方法。方法的检测限、定量限等指标均达到实际残留监控的要求。应用建立的分析方法，成功地对市场上多种实际样品中大环内酯类药物残留进行了检测，取得较满意的结果。

目录

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声明

第一章绪论

1.1大环内酯类抗生素概况

1.1.1大环内酯类抗生素理化性质和分类

1.1.2大环内酯类抗生素的药理特性

1.1.3大环内酯类抗生素在体内的代谢

1.1.4大环内酯类抗生素的残留途径与原因

1.1.5大环内酯类抗生素的残留危害与监控

1.2大环内酯类抗生素的检测方法

1.2.1微生物法

1.2.2薄层色谱法(TLC)

1.2.3气质联用法(GC-MS)

1.2.4高效液相色谱法(HPLC)

1.2.5液质联用法(LC-MS，LC-MS／MS)

1.2.6免疫测定法(ELISA)

1.3样品处理方法

1.3.1提取溶剂

1.3.2提取方法

1.3.3净化方法

1.4立题依据和研究内容

第二章大环内酯类抗生素的HPLC分离检测方法的建立

2.1前言

2.2实验部分

2.2.1仪器与试剂

2.2.2液相色谱条件

2.3结果与讨论

2.3.1检测波长的选择

2.3.2色谱柱的选择

2.3.3柱温的选择

2.3.4流动相pH的优化

2.3.5流动相梯度的优化

2.3.6标准曲线

2.4本章小结

第三章动物性食品中大环内酯类残留检测的样品处理方法优化

3.1前言

3.2实验部分

3.2.1仪器与试剂

3.2.2样品处理方法

3.2.3样品净化方法

3.2.4 LC-MS条件

3.3结果与讨论

3.3.1提取溶剂的选择

3.3.2固相萃取柱的选择

3.3.3淋洗液与洗脱液的优化

3.3.4洗脱液用量的优化

3.3.5回收率与精密度

3.3.6质谱定性实验

3.4本章小结

第四章LC-MS测定方法的建立

4.1前言

4.2实验部分

4.2.1仪器与试剂

4.2.2 LC-MS条件

4.2.3样品处理方法

4.2.4 LC-MS流动相

4.3.5 LC-MS检测模式

4.3结果与讨论

4.3.1内标物质的选择

4.3.2锥孔电压的优化

4.3.3标准曲线

4.3.4回收率与精密度

4.3.5实际样品分析

4.4本章小结

第五章总结和展望

5.1对本课题的总结

5.2本课题的不足和展望

致谢

参考文献

附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文