共轭亚油酸甘油酯的酶法制备及其降脂功能的研究

摘要

现在人们对油脂营养的关注度日益提高，基于结构脂质具有特殊的营养和功能性质，人们对含有功能性脂肪酸的结构脂质也越来越感兴趣。共轭亚油酸(CLA)是亚油酸的一组位置和几何异构体的通称，具有抑癌、调节血脂、抗动脉粥样硬化、免疫调节、减肥等多种重要生理功能。CLA甘油酯(CLA-SL)是一种含有CLA的结构脂质。本文对CLA-SL的酶促合成、纯化以及调节血脂、减肥功能性进行了研究。主要内容如下：
　　 ⑴研究了在无溶剂体系中固定化脂肪酶Novozym435催化CLA和葵花籽油反应合成CLA-SL。对影响反应的主要几个因素-反应体系含水量、底物摩尔比、加酶量、反应温度、反应时间进行优化，考察了CLA的总接入率和sn-2位接入率，建立的最优工艺条件为:体系含水量1%，底物摩尔比(CLA:葵花籽油)3.55:1，酶用量13.7%，反应温度55℃，反应时间37h。在此条件下，CLA的总接入率和sn-2位接入率分别为17.1%和2.89%。
　　 ⑵通过对预热温度、进料速率、加热温度和刮板速率的控制，研究优化了分子蒸馏纯化CLA-SL的工艺条件。确定采用两级分子蒸馏对CLA-SL粗产品进行纯化，一、二级分子蒸馏条件均为:预热温度80℃，进料速率2mL/min，加热壁面温度180℃，刮板速率为100r/min，冷凝水温度25℃，系统压力1Pa。经过两级分子蒸馏后，重相酸价由98.5mgKOH/g降低至0.23mgKOH/g，CLA-SL产品的得率为43.5%，收率为91.0%。分子蒸馏CLA-SL产品的理化指标:色泽Y20R2.2，酸价0.23mgKOH/g，过氧化值3.15mmol/kg，碘值131gI/100g，皂化值192mgKOH/g。
　　 ⑶动物实验发现，CLA-SL在较高剂量水平下可以显著降低小鼠血清甘油三酯(TG)的浓度，同时使高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量有显著增加，说明CLA-SL在降血脂方面有一定效果。CLA-SL可以明显地降低AI值，增高AII值，显著降低发生动脉硬化的风险。另外，CLA-SL未对小鼠体重产生显著的影响，但是显著降低了小鼠身体的脂肪含量，同时增加了小鼠身体的水分和蛋白质含量，可见，CLA-SL在减肥方面的作用是有效的。

目录

文摘

英文文摘

声明

1 引言

1.1 共轭亚油酸的概述

1.2.1 共轭亚油酸的结构

1.2.2 共轭亚油酸的来源

1.2 共轭亚油酸的生理功能

1.2.1 抗癌作用

1.2.2 减肥作用

1.2.3 调节免疫功能

1.2.4 防止动脉硬化

1.2.5 其它方面的作用

1.3 结构脂质的酶法合成

1.3.1 直接酯化法

1.3.2 酸解法

1.3.3 酯交换法

1.4 结构脂质的提纯

1.5 立题背景和研究内容

1.5.1 立题背景

1.5.2 研究内容

2 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验仪器

2.3 实验方法

2.3.1 酶促酸解

2.3.2 CLA总接入率的测定分析

2.3.3 sn-2位CLA接入率的测定分析

2.3.4 气相色谱分析

2.3.5 分子蒸馏纯化共轭亚油酸甘油酯

2.3.6 分子蒸馏重相酸价的检测

2.3.7 分子蒸馏重相组成的检测

2.3.8 共轭亚油酸甘油酯的理化指标分析

2.3.9 动物实验方法

3 结果与讨论

3.1 共轭亚油酸甘油酯的无溶剂体系酶促酸解制备

3.1.1 共轭亚油酸的GC分析

3.1.2 脂肪酶的筛选

3.1.3 体系含水量的影响

3.1.4 底物摩尔比的影响

3.1.5 酶用量的影响

3.1.6 反应温度的影响

3.1.7 反应时间的影响

3.1.8 响应面分析法确定最佳工艺参数

3.1.9 脂肪酶的重复利用

3.1.10 酶促酸解前后的脂肪酸组成

3.1.11 sn-2位脂肪酸的测定

3.2 共轭亚油酸甘油酯的纯化及其理化性质的分析

3.2.1 预热温度的影响

3.2.2 进料速率的影响

3.2.3 加热温度的影响

3.2.4 刮板转速的影响

3.2.5 分子蒸馏操作条件的确立

3.2.6 分子蒸馏产品收率及纯度

3.2.7 共轭亚油酸甘油酯的理化指标分析

3.3 共轭亚油酸甘油酯的降脂功能性研究

3.3.1 共轭亚油酸甘油酯对小鼠体重的影响

3.3.2 共轭亚油酸甘油酯对小鼠血脂的影响

3.3.3 共轭亚油酸甘油酯对小鼠身体组成的影响

4 结论

致谢

参考文献

附录：攻读硕士学位期间发表的论文