线粒体DNA D-Loop区基因突变、ROS水平与肝癌关系的研究

摘要

目的:研究线粒体DNA D-Loop区在原发性肝癌中的突变情况,同时对原发性肝癌患者血清及组织内ROS和MnSOD测定,了解ROS水平与突变的关系,以及突变、ROS、MnSOD三者在肿瘤发生中的作用.方法:选择20例原发性肝癌组织及其邻近的正常组织,用PCR方法将线粒体DNAD-LOOP扩增后测序.同时采用Fenton反应及Griess显色原理对20例患者血清中的ROS进行测定,组织内ROS的测定采用流式细胞术技术测定.对20例患者血清及组织内MnSOD采用黄嘌呤氧化酶法进行测定(血清ROS、MnSOD的正常对照为正常人血清,而组织内ROS、MnSOD的正常对照为癌旁组织).结果:在20对原发性肝癌组织中存在8对mtDNA D-LOOP突变,突变率为40％,共发现突变位点53个,包括2个插入,11个缺失,40个点突变,其中T-C,C-T的转换占75％,4个属于微卫星结构.癌组织突变一般伴随癌旁组织突变,癌组织突变位点高于癌旁组织,并且所有的突变均为均一性的突变.发现一例标本的癌组织和癌旁组织均有大片段丢失.原发性肝癌患者血清和组织内ROS水平明显高于正常对照及癌旁对照(P<0.01),肿瘤患者血清中T-SOD和MnSOD水平低于正常对照(P<0.01),血清中ROS水平与MnSOD水平明显负相关(t=10.27,r=-0.924,p<0.01),癌组织内T-SOD水平和MnSOD水平明显高于癌旁组织(P<0.01),同时我们发现在D-LOOP区发生突变的组织中ROS水平明显高于未发生突变的肝癌患者标本(P<0.01),发生突变的癌旁组织内ROS水平明显高于未发生突变的癌旁组织(P<0.01).结论:1、线粒体DNA D-Loop区是一个高度多态性和突变性的区域,在原发性肝癌中突变率较高.2、肝癌的线粒体DNA发生的点突变可能与ROS、MnSOD的异常有关.3、ROS升高可能参与肝癌的发生,而MnSOD在消除ROS阻止肝癌发生中可能发挥重要作用.4、通过对血清和组织的ROS和MnSOD测定,提示血清中ROS、MnSOD与组织ROS、MnSOD之间可能有重新分配的过程.

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前言

综述线粒体、ROS、肿瘤

第一章肝癌线粒体D-LOOP基因突变分析

1、材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第二章肝癌患者血清中ROS及MnSOD的测定

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

第三章细胞内ROS及组织内MnSOD的测定

1.材料与方法

2.结果

3.讨论

结论

致谢

参考文献

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