DmMAGE、Dmp53与一种新的果蝇蛋白CG13142相互作用研究

摘要

自1991年Van der Bruggen等人首次发现MAGE—1抗原以来，在人类细胞中已发现25个MAGE同源基因。目前关于MAGE蛋白在肿瘤特异性免疫治疗方面已进行了大量的研究，但对于该蛋白家族在正常生命活动中的功能依然知之甚少。 根据果蝇蛋白相互作用数据库分析结果，我们克隆并鉴定了果蝇DmMage及与其相互作用的基因CG13142。通过制备针对这两种蛋白的多克隆抗体，分别检测了这两个基因在果蝇发育中的表达水平、组织学分布及其细胞定位。结果表明：果蝇DmMage基因在正常组织中(尤其是神经系统)表达，其主要分布在胞浆中；CG13142不仅分布在胞质中，在核内亦可检测到呈散在不均一分布，未见与染色质DNA共定位，在胚胎发育后期主要存在于花环细胞(garland cell)中，成虫盘、蛹及成虫中均有低水平表达。 为了了解这两个基因的在体功能，我们分别构建了DmMage及CG13142基因的过表达转基因果蝇。在与各种全身性或组织特异性表达的GAL4果蝇杂交后，并未发现明显的表型变化。但是当这两株果蝇分别与LJAS—Dmp53共同驱动后，发现它们可以不同程度地挽救Dmp53的致死效应。在Dmp53缺陷的果蝇中CG13142蛋白的表达量明显升高：而当Dmp53过量表达时，CG13142的蛋白量则有所下降。GST pull down实验以及免疫共沉淀实验则显示CG13142可以与Dmp53发生直接相互作用。提示：CG13142的过表达可以部分抑制Dmp53的过表达效应，其本身可能也受到Dmp53反馈抑制调控。在遗传学水平，DmMAGE和Dmp53关联，但体外实验未发现两者直接相互作用。鉴于DmMAGE可以和CG13142直接相互作用，因此我们推测其可能是通过CG13142或其它胞内因子间接地影响Dmp53的功能。

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文摘

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绪言

文献综述 p53功能研究进展

第一章果蝇MAGE及CG13142基因的生物信息学分析

前言

材料与方法

结果

第二章抗果蝇DmMAGE及CG13142抗体的制备及特异性分析

前言

材料与方法

结果

第三章DmMAGE及CG13142蛋白的表达谱分析

前言

材料与方法

结果

第四章DmMAGE及CG13142及Dmp53相互作用的遗传学分析

前言

材料与方法

结果

第五章DmMAGE、CG13142及Dmp53体外相互作用分析

前言

材料与方法

结果

讨论

总结与展望

致谢

参考文献

作者简介