蛋白酶体抑制剂DCI对胃癌细胞生物学效应的体外实验

摘要

目的：探讨蛋白酶体抑制剂3,4二氯异香豆素(3,4-Dichloroisocoumarin,DCI)对人胃癌细胞系BGC823体外增殖和凋亡的影响，观察低浓DCI是否增加BGC823细胞对顺铂的敏感性，并对相关机理进行初步研究。 方法：将DCI加入BGC823胃癌细胞，采用四氮唑蓝(MTT)比色法测细胞的生长抑制效应，流失细胞术、电镜、分析观察DCI对细胞凋亡的诱导作用，RT-PCR分析DCI作用于胃癌细胞后P38MAPK在基因表达水平改变的情况。在增敏的实验部分以MTT法观察顺铂联用DCI对胃癌细胞存活率的影响，流式细胞术测定低浓度DCI细胞株对BGC823细胞周期的再分布的影响。Western Blotting检测经DCI和顺铂处理的细胞核转录因子I-κB的变化。 结果：MTT比色法显示DCI可明显抑制BGC823细胞体外增殖，随着DCI浓度的增加和处理时间延长，胃癌细胞增殖受到抑制更明显。DCI作用于胃癌细胞后，BGC823细胞出现不同程度的改变，主要表现为细胞核固缩，核内染色质聚集于核膜，内侧呈团块或新月状，并可见凋亡小体形成，胞质空泡化，出现大小不一的空泡及胞质崩解，可见线粒体肿胀，部分细胞胞膜破裂。流式细胞术显示DCI可诱导胃癌细胞早期凋亡，凋亡具有量效关系，并可以使胃癌细胞阻滞在G<,1>期。RT-PCR法提示DCI作用于胃癌细胞后可以使P38MAPK基因表达上调，这可能在DCI引起胃癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。增敏实验中，低浓度的DCI对胃癌细胞生长无明显抑制作用，但可以显著增强顺铂对BGC823细胞的杀伤作用。流失细胞术显示，顺铂可以引起胃癌细胞凋亡；低浓度的DCI未引起BGC823细胞凋亡，但可以增强顺铂促胃癌细胞阻凋亡作用。Western blotting方法显示顺铂作用于胃癌细胞后激活细胞自我保护机制，引起核转录因子阻遏物I-κB的降解，而DCI可以抑制I-κB蛋白泛素化降解，增强其表达。 结论： 1.DCI可抑制人胃癌BGC823细胞增殖并促进其凋亡，在此过程中P38MAPK通路激活发挥重要作用。 2.低浓度的DCI对胃癌细胞增殖无影响，但可以增强顺铂对BGC823细胞的敏感性，可能与DCI可以抑制I-κB蛋白泛素化降解相关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要缩略语

声明

前 言

综述：蛋白酶体抑制剂药基础与临床应用进展

材料与试剂

实验(一)DCI对胃癌细胞杀伤作用及其机理的研究

1.仪器与试剂：

2实验方法

实验结果

第二部分顺铂联合蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞作用及其机制的研究

1材料与方法

2结果

讨 论

结论

致 谢

参考文献

作者简介