BD0801单药及联合5-FU体外抑制HCC细胞HepG2和人脐静脉内皮细胞增殖及作用机制的研究

摘要

目的:
　　研究人源化抗VEGF单克隆抗体BD0801单药或联合氟尿嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)体外对人肝细胞癌(HCC)细胞株HepG2和人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)的增殖抑制作用及相关作用机制。
　　方法:
　　应用不同浓度BD0801或BD0801联合5-FU体外作用于人HCC细胞株HepG2和HUVEC，采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖抑制率;DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡;流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测细胞培养液中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)水平变化;蛋白印迹法(Western Blot)检测细胞VEGF、血管内皮生长因子受体(VEGFR)蛋白表达水平。
　　结果:
　　1、BD0801对HepG2细胞和HUVEC的增殖均有一定的抑制作用，BD0801对两株细胞的增殖抑制作用均高于阳性对照药物贝伐珠单抗(Bevacizumab，Bev)。BD0801较Bev能更有效地诱导HepG2细胞、HUVEC凋亡。BD0801可使HepG2细胞或HUVEC阻滞于G0/G1期。与Bev比较，BD0801能更有效地降低两株细胞培养液中的VEGF水平，并更有效地抑制两株细胞中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2蛋白的表达。
　　2、与BD0801或5-FU单药作用比较，BD0801联合5-FU(BD0801+5-FU)可显著增强抑制HepG2细胞、HUVEC增殖及诱导细胞凋亡，使S期细胞比例上升，并增强下调细胞培养液中VEGF含量及细胞中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2蛋白表达水平作用。与Bev联合5-FU(Bev+5-FU)作用比较，BD0801+5-FU能更有效地抑制HepG2细胞、HUVEC增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞培养液中VEGF水平及下调细胞中VEGF、VEGFR-1、VEGFR-2蛋白表达水平。
　　结论:
　　BD0801对HCC细胞株HepG2、HUVEC的生长均有一定抑制作用，且能诱导这两株细胞凋亡、阻滞细胞周期，其机制可能与抑制VEGF/VEGFR信号通路有关。BD0801联合5-FU可协同抑制HepG2细胞、HUVEC生长、诱导细胞凋亡，其作用机制可能与协同抑制VEGF/VEGFR信号通路有关。BD0801有可能成为治疗HCC的有效药物，值得进一步深入研究。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一章 文献综述 实体肿瘤中VEGF／VEGFR自分泌机制及其功能研究进展

第二章 实验材料和细胞培养

1、实验材料

2、细胞培养

第三章 BD0801单药体外抑制HCC细胞HepG2和人脐静脉内皮细胞增殖及作用机制的研究

1、实验方法

2、结果

第四章 BD0801联合5-FU体外抑制HCC细胞HepG2和人脐静脉内皮细胞增殖及作用机制的研究

1．实验方法

2、结果

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

致谢

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