奥曲肽-紫杉醇偶联物通过p38MAPK信号通路逆转人卵巢癌A2780/Taxol紫杉醇耐药性的研究

摘要

本文分为以下两个部分进行探讨：
　　第一部分 奥曲肽-紫杉醇偶联物通过p38MAPK信号通路逆转人卵巢癌A2780/Taxol紫杉醇耐药性的体外实验研究
　　目的:研究p38MAPK信号通路在奥曲肽-紫杉醇偶联物(本实验室前期合成，专利号:ZL201310232603.X)逆转人卵巢癌细胞A2780/Taxol紫杉醇的耐药性中的可能作用机制。
　　方法:(1)外购卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol传代培养，取对数生长期细胞继续传代分8组:①空白对照组（Control组）:RPMI1640完全培养液;②奥曲肽(Octreotide，OCT)组（OCT组）:含10μg/ml OCT的RPMI1640完全培养液;③奥曲肽+环生长抑素(Cyclo-somatostatin，CSS)组（OC组）:含10μg/ml OCT和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培养液;④紫杉醇(Paclitaxel，PTX)组（PTX组）:含8μg/ml PTX的RPMI1640完全培养液;⑤紫杉醇+奥曲肽组（PO组）:含10μg/ml OCT和8μg/ml PTX的RPMI1640完全培养液;⑥紫杉醇+奥曲肽+环生长抑素组（POC组）:含10μg/ml OCT、8μg/ml PTX和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培养液;⑦紫杉醇-奥曲肽偶联组（P-O组）:含20μg/ml OCT-PTX偶联物的RPMI1640完全培养液;⑧紫杉醇-奥曲肽+环生长抑素组（P-OC组）:含20μg/ml OCT-PTX偶联物和0.234μg/ml CSS的RPMI1640完全培养液。(2)检测各实验组耐药细胞系p38MAPK信号通路的表达活性，检测p38的磷酸化水平以及此信号通道下游VEGF蛋白的表达变化。(3)流式细胞仪检测各实验组A2780/Taxol细胞的凋亡情况。(4)免疫组化法检测各实验组A2780/Taxol细胞内βⅢ微管蛋白的表达。
　　结果:P-O组p38MAPK信号通路的表达活性最低，P-p38MAPK的表达水平及其下游VEGF蛋白表达水平同步下调，且细胞凋亡率最高(9.65％);βⅢ微管蛋白颗粒密度减低，数量减少，染色变浅。而P-OC组，p38MAPK信号通路活性上调，P-p38MAPK的表达水平及其下游VEGF蛋白表达水平增加，细胞凋亡率比P-O组明显降低(3.95％);βⅢ微管蛋白颗粒密度升高，数量增加，染色变深。
　　结论:奥曲肽-紫杉醇偶联物可通过抑制p38MAPK信号通路的表达，逆转人卵巢癌细胞A2780/Taxol的紫杉醇耐药性。
　　第二部分 奥曲肽-紫杉醇偶联物通过p38MAPK信号通路逆转人卵巢癌A2780/Taxol紫杉醇耐药性的荷瘤裸鼠实验研究
　　目的:构建人卵巢癌A2780/Taxol耐药细胞裸鼠移植瘤模型。在体模式下研究p38MAPK信号通路在奥曲肽-紫杉醇偶联物逆转人卵巢癌A2780/Taxol裸鼠移植瘤对紫杉醇的耐药性中的作用。
　　方法:(1)将A2780/Taxol制成单细胞悬液，以2×106个细胞/只，分别接种于4-6周龄雌性裸鼠右侧腋窝靠近背部皮下，共接种80只。荷瘤裸鼠成瘤后使用随机数表法将80只接种的裸鼠随机分成8组，每组裸鼠各10只;(2)各实验组荷瘤裸鼠予每周尾静脉注射不同药物一次，共三周。Control组:尾静脉予生理盐水0.1ml; OCT组:尾静脉予150nmol/kg OCT0.1ml; OC组:尾静脉予奥曲肽150nmol/kg+环生长抑素1.282nmol/kg共0.1ml; PTX组:尾静脉予150nmol/kg紫杉醇0.1ml;PO组:尾静脉予紫杉醇150nmol/kg+奥曲肽150nmol/kg共0.1ml; POC组:尾静脉予紫杉醇150nmol/kg+奥曲肽150nmol/kg+1.282nmol/kg共0.1ml;P-O组:尾静脉予紫杉醇-奥曲肽150nmol/kg0.1ml; P-OC组:尾静脉予紫杉醇-奥曲肽150nmol/kg+环生长抑素1.282nmol/kg共0.1ml。第四周初处死裸鼠。(3)检测各组裸鼠移植瘤p38MAPK信号通路的表达活性，检测p38的磷酸化水平以及此信号通道下游VEGF蛋白的表达变化。(4)流式细胞仪检测各实验组裸鼠移植瘤A2780/Taxol细胞的凋亡情况。(5)免疫组化法检测各实验组移植瘤细胞内βⅢ微管蛋白的表达。
　　结果:接种A2780/Taxol的裸鼠在一周后均有成瘤，平均直径0.8cm，均未见到裸鼠精神萎靡、活动迟缓、腹泻、肿瘤破溃等异常情况。P-O组裸鼠移植瘤体积缩小最显著，平均体积0.73cm3，与其他各实验组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。P-O组P-p38MAPK信号通路及其下游VEGF蛋白表达水平均最低，与其他各实验组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。P-O组移植瘤A2780/Taxol细胞凋亡率最高(10.56％)，与其他各实验组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。P-O组βⅢ微管蛋白颗粒密度最低，数量最少，染色最浅。P-OC作用后移植瘤体积明显增大，平均体积1.65cm3，与其他各实验组比较差异有统计学意义（P＜0.05），P-p38表达水平及其下游VEGF蛋白表达水平均明显增加;移植瘤A2780/Taxol细胞凋亡率明显下降(5.05％)，与其他各实验组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。βⅢ微管蛋白颗粒密度升高，数量增加，染色明显加深。
　　结论:奥曲肽-紫杉醇偶联物可通过抑制p38MAPK信号通路，逆转人卵巢癌A2780/Taxol裸鼠移植瘤的紫杉醇耐药性。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 奥曲肽-紫杉醇偶联物通过p38MAPK信号通路逆转人卵巢癌A2780／Taxol紫杉醇耐药性的体外实验研究

引言

第一章 实验材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法和步骤

1．3 统计学处理

第二章 结果

第三章 讨论

第二部分 奥曲肽-紫杉醇偶联物通过p38MAPK信号通路逆转人卵巢癌A2780／Taxol紫杉醇耐药性的荷瘤裸鼠实验研究

引言

第一章 实验材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法和步骤

1．3 统计学处理

第二章 结果

第三章 讨论

结论

研究存在问题及展望

第三部分 综述 卵巢癌的分子靶向药物治疗研究进展

参考文献

致谢

作者简介