一种紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物的制备方法

摘要

本发明是一种紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物的制备方法，该制备方法包括以下步骤：步骤1：在非质子溶剂中，紫杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列酸与二苯基N-琥珀酰亚胺磷酸酯（SDPP）在叔胺的催化下得到N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇-2’-连接序列酯或N-羟基丁二酰亚胺多烯紫杉醇-2’-连接序列酯；步骤2：在非质子溶剂中，N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇-2’-连接序列酯或N-羟基丁二酰亚胺多烯紫杉醇-2’-连接序列酯与醋酸奥曲肽在叔胺的催化下偶联得到紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。本发明克服目前市场上无法买到奥曲肽树脂复合物和使用昂贵的催化剂难题，使得上述偶联物能够采用市售原料和廉价的试剂二苯基N-琥珀酰亚胺磷酸酯（SDPP）进行大量合成。

说明书

技术领域

本发明提供了一种紫杉醇或多烯紫杉醇的奥曲肽偶联物的合成方法。属于药 物合成的技术领域。

背景技术

生长抑素（SST）是一种存在于胃粘膜、胰岛、胃肠道神经、垂体后叶和中 枢神经系统中的神经肽激素，它被确认为可以调节诸如分泌、细胞分裂、增殖和 细胞凋亡等基本过程。奥曲肽（octreotide）是一种人工合成的生长抑素八肽衍生 物，它与生长抑素的作用谱相似而生物半衰期更长，且具有更强更持久的作用及 更强的选择性。自1983年至今，不少文献报道了奥曲肽对于一些疾病的治疗影 响和系统评价，它已经被证实了对神经内分泌肿瘤、消化道肿瘤、乳腺癌和白血 病等多种肿瘤具有抑制作用。通过实践发现，奥曲肽能用于改善化疗的不良反应 和晚期癌症患者的多种症状，被用于诊断或辅助治疗多种肿瘤疾病。

紫杉醇及多烯紫杉醇是目前卵巢癌化疗的一线药物，但相当多的卵巢癌患者 因产生耐药导致化疗失败，而复发性卵巢癌治疗效果很不理想，已有文献报道了 奥曲肽对紫杉醇抑制非小细胞肺癌细胞的增效作用，这些成果促使开发奥曲肽作 为一种特定的载体通过生长抑素受体的胞吞作用来运送一些抗肿瘤药物（如紫杉 醇）进入肿瘤细胞。

台湾学者首次报道了紫杉醇奥曲肽偶联物在肿瘤细胞中的活性^[1]，其采用六 氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)为催化剂，紫杉醇丁二酸酯与 固相合成得到的奥曲肽反应，经解离树脂纯化后冻干得紫杉醇奥曲肽偶联物，此 方法中奥曲肽树脂复合物在市场上不能买到，催化剂PyBOP价格昂贵，这给紫 杉醇奥曲肽偶联物的合成及应用带来困难。

[1]Chun-Ming Huang,Ying-Ta Wu,Shui-Tein Chen.Targeting delivery of paclitaxel  into tumor cells via somatostatin receptor endocytosis[J].Chemistry&Biology,2000, 7(7):453-461.

发明内容

技术问题：本发明的目的在于提一种紫杉醇或多烯紫杉醇的奥曲肽偶联物制 备方法，克服目前市场上无法买到奥曲肽树脂复合物和使用昂贵的催化剂难题， 使得上述偶联物能够采用市售原料和廉价的试剂二苯基N-琥珀酰亚胺磷酸酯 （SDPP）进行大量合成。

技术方案：本发明的紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物的制备方法包括以 下步骤：

步骤1：在非质子溶剂中，紫杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列 酸与二苯基N-琥珀酰亚胺磷酸酯（SDPP）在叔胺的催化下得到N-羟基丁二酰亚 胺紫杉醇-2’-连接序列酯或N-羟基丁二酰亚胺多烯紫杉醇-2’-连接序列酯；

步骤2：在非质子溶剂中，N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇-2’-连接序列酯或N-羟基 丁二酰亚胺多烯紫杉醇-2’-连接序列酯与醋酸奥曲肽在叔胺的催化下偶联得到紫 杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。

所述的步骤1中，非质子溶剂优选为乙腈，叔胺优选为三乙胺；所述连接序 列Linker为-CO-CH₂-(X)n-CH₂-CO-；

其中，X为O(CH₂CH₂OCH₂CH₂CH₂NHCOCH₂-)₂,-CO-,-O-,-S-,-CH₂-, -CHCH₃-或-C(CH₃)-;n为0或1，

所述的步骤2中，所述的非质子溶剂优选为二甲基甲酰胺DMF，叔胺优选为 三乙胺，

所述的步骤2中，N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇或多烯紫杉醇连接序列酯与醋酸 奥曲肽的摩尔比为1～1.5比1时，主要产物为单紫杉醇或单多烯紫杉醇奥曲肽偶 联物；N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇或多烯紫杉醇连接序列酯与醋酸奥曲肽的摩尔比 为2～5比1时，主要产物是二紫杉醇或二多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。

所述的N-羟基丁二酰亚胺紫杉醇或多烯紫杉醇连接序列酯与醋酸奥曲肽的 摩尔比为优选1.1比1，主要产物为单紫杉醇或单多烯紫杉醇奥曲肽偶联物；N- 羟基丁二酰亚胺紫杉醇或多烯紫杉醇连接序列酯与醋酸奥曲肽的摩尔比优选为 2.2比1时，主要产物是二紫杉醇或二多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。

另一种简易的紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物的制备方法包括以下步骤：

步骤a：把醋酸奥曲肽溶解于水中，经半透膜或柱层析去除醋酸根干燥后得 到游离奥曲肽；

步骤b：在非质子溶剂中，将游离奥曲肽、SDPP、紫杉醇-2’-连接序列酸或 多烯紫杉醇-2’-连接序列酸混合，在叔胺催化下偶联得到紫杉醇或多烯紫杉醇奥 曲肽偶联物。

所述的步骤b中，所述的非质子溶剂优选为二甲基甲酰胺DMF，叔胺优选为 三乙胺。

所述的步骤b中，紫杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列酸与游离 奥曲肽的摩尔比为1～1.5比1时，主要产物为单紫杉醇或单多烯紫杉醇奥曲肽偶 联物；紫杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列酸与游离奥曲肽的摩尔 比为2～5时，主要产物是二紫杉醇或二多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。

所述的紫杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列酸与游离奥曲肽的 摩尔比优选为1.1比1时，主要产物为单紫杉醇或单多烯紫杉醇奥曲肽偶联物；紫 杉醇-2’-连接序列酸或多烯紫杉醇-2’-连接序列酸与游离奥曲肽的摩尔比优选为 2.2时，主要产物是二紫杉醇或二多烯紫杉醇奥曲肽偶联物。

有益效果：采用可以广泛得到的紫杉醇、多烯紫杉醇、醋酸奥曲肽和廉价试剂 SDPP制备上述偶联物，克服目前市场上无法买到奥曲肽树脂复合物和使用昂贵的 催化剂难题，使得上述偶联物能够采用市售原料和廉价的试剂二苯基N-琥珀酰 亚胺磷酸酯（SDPP）进行大量合成。

具体实施方式

一、紫杉醇、多烯紫杉醇在2’位与连接序列反应，通常采用成酯的方式反应。

可用于本发明的连接剂如:二甘醇酐、丁二酸酐、戊二酸酐、3-羰基戊二酸酐、 3-甲基戊二酸酐、3,3’-二甲基戊二酸酐等。紫杉醇或多烯紫杉醇与连接剂反应时， 对于不同的连接剂，连接反应的条件基本相同。

二、紫杉醇或多烯紫杉醇链接物酯在SDPP作用下与醋酸奥曲肽反应。

紫杉醇或多烯紫杉醇链接物酯首先与SDPP反应，检测紫杉醇或多烯紫杉醇 链接物酯反应完成后加入醋酸奥曲肽溶液，得到紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联 物（TM）。

紫杉醇或多烯紫杉醇链接物酯在SDPP的催化下与不含醋酸和/或醋酸盐的奥 曲肽反应，得到紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物（TM）。

在上述操作中，必须使用胺来催化反应，可以用于此反应的胺为叔胺，优选 为三乙胺。

在上述操作中，可以调节紫杉醇或多烯紫杉醇链接物酯与奥曲肽的摩尔比得 到1比1的紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽偶联物、2比1的紫杉醇或多烯紫杉醇奥曲肽 偶联物。

在上述操作中，反应温度控制在-10～50℃，优选为0～30℃。

在上述操作中，紫杉醇或多烯紫杉醇链接物酯与SDPP反应在非质子溶剂中 反应，非质子溶剂可以是乙腈，二甲基甲酰胺(DMF)，DMI，二甲基亚砜（DMSO）， 六甲基磷酰三胺(HMPA)，优选为乙腈。

在上述操作中，有醋酸奥曲肽、奥曲肽参与的反应，使用溶剂为非质子溶剂， 非质子溶剂可以是乙腈，二甲基甲酰胺(DMF)，DMI，二甲基亚砜（DMSO）， 六甲基磷酰三胺(HMPA)，优选为二甲基甲酰胺(DMF)。

本发明通过以下实施例对各中间体及偶合物的合成制备方法进行描述。实施 例不限制本发明，本发明的保护范围由权利要求限定。

实施例1：

将紫杉醇200mg（0.234mmol）、丁二酸酐300mg（3mmol）真空干燥5小时， 溶解在5ml干燥的吡啶中，30℃搅拌反应24h，减压回收溶剂至干，残渣用10ml 冰水搅拌，过滤后残渣溶于10ml丙酮，搅拌下滴加10ml水，过滤析出固体，减 压干燥得到紫杉醇丁二酸酯，收率65%，纯度96%，ESI-MS（m/z）：976[M+Na]⁺； 992[M+K]⁺。

实施例2：

将多烯紫杉醇200mg（0.248mmol）、二甘醇酐348mg（3mmol）真空干燥5小 时，溶解在5ml干燥的吡啶中，30℃搅拌反应24h，减压回收溶剂至干，残渣用10ml 冰水搅拌，过滤后残渣溶于10ml丙酮，搅拌下滴加10ml水，过滤析出固体，减 压干燥得到多烯紫杉醇二甘醇酸酯，收率63%，纯度93%，ESI-MS（m/z）： 946[M+Na]⁺。

实施例3：

将紫杉醇丁二酸酯25mg（0.025mmol）、SDPP30mg（0.086mmol）、三乙胺30mg （0.296mmol）溶于0.5ml无水乙腈中，室温搅拌过夜，TLC检测反应完毕后，真 空浓缩，将粗品混合液溶入乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤，干燥后回收溶剂得目标 产物，ESI-MS（m/z）：1052.15[M+H]⁺，不需要进一步纯化，直接用于下一步 反应。

实施例4：

将实施例3产物溶解在3ml DMF中，加入醋酸奥曲肽20mg（0.020mmol）和三 乙胺30mg（0.296mmol），5℃反应24h，在Alltima C18柱22*250mm，30min线 性梯度洗脱，30%B in A(A:5%乙腈/95%水/0.1%TFA;B:95%乙腈/5%水 /0.1%TFA)到90%B，搜集大约10min主峰部分，冻干得到紫杉醇奥曲肽偶联物 23mg(0.012mmol)，收率60%，纯度为98%，ESI-MS（m/z）：1954[M+H]⁺。

实施例5；

多烯紫杉醇二甘醇酸酯60mg（0.065mmol）、SDPP60mg（0.172mmol）、三乙 胺60mg（0.592mmol）溶于1ml无水乙腈中，室温搅拌过夜，TLC检测反应完毕 后，真空浓缩，将粗品混合液溶入乙酸乙酯，饱和食盐水洗涤，干燥后回收溶剂 得目标产物，不需要进一步纯化，直接用于下一步反应。

实施例6：

将实施例5产物溶解在3ml DMF中，加入醋酸奥曲肽20mg（0.020mmol）和三 乙胺60mg（0.592mmol），5℃反应24h，在Alltima C18柱22*250mm，30min线 性梯度洗脱，30%B in A(A:5%乙腈/95%水/0.1%TFA;B:95%乙腈/5%水 /0.1%TFA)到90%B，搜集大约15min主峰部分，冻干得到二多烯紫杉醇奥曲肽 偶联物33mg(0.012mmol)，收率60%，纯度为98%，ESI-MS（m/z）：2852[M+Na]⁺。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能 认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都 应当视为属于本发明的保护范围。