黄芩素对D-氨基半乳糖/内毒素诱导急性肝衰竭预防作用及相关机制研究

摘要

目的：研究黄芩素对D-氨基半乳糖联合内毒素诱导小鼠肝衰竭动物模型的预防作用及相关作用机制。
　　方法：应用DPPH测定黄芩素抗氧化清除自由基能力；从血清丙氨酸氨基转化酶（ALT）、天冬氨酸氨基转化酶（AST）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）和肝组织中谷胱甘肽（GSH）等水平出发评价D-氨基半乳糖（D-galactosamine，D-GalN，700 mg/kg）联合内毒素（LPS，10μg/kg）诱导小鼠肝衰竭动物模型。黄芩素肝保护作用研究，将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组、黄芩素低剂量组（50mg/kg）、黄芩素中剂量组（100mg/kg）、黄芩素高剂量组（150mg/kg）、水飞蓟素阳性对照组（100mg/kg），腹腔注射D-GalN/LPS后，2h后采血测定TNF-α含量，6h后取血取肝脏，测定血清ALT、AST、NO、iNOS，将肝脏分成两部分，一部分存放于10％中性福尔马林，一部分存放液氮后置于-80℃低温冰箱保存，备用。测定小鼠肝组织中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。采用western blot测定小鼠肝组织中细胞因子，caspase-3、caspase-8、Bax、Bcl-2、FLIP的蛋白表达。
　　结果本实验研究结果表明：1）黄芩素能够抗氧化清除自由基，对自由基的清除随着浓度的增大而增大，呈现一定的量效关系，但增加到一定浓度时，清除率基本不变；黄芩素对DPPH自由基清除作用大于黄芩苷。2）D-GalN/LPS诱导小鼠急性肝衰竭动物模型，在小鼠存活情况下，6h时血清ALT、AST达最高峰；6h肝组织中GSH含量消耗达最低；TNF-α在2h升高具有显著性差异，其后逐渐降低，6h时基本恢复正常；血清NO、iNOS含量2h后开始升高，6h升高最多。3） D-GalN/LPS诱导小鼠急性肝衰竭动物模型，预防给予黄芩素，小鼠血清ALT、AST水平显著下降，TNF-α下降相对于对照组具有显著性差异；血清NO、iNOS相对于正常组降低具有显著性差异；肝组织中GSH、SOD、CAT、GSH-Px活性升高、MDA降低均具有显著性差异；caspase-3与caspase-8激活片段被抑制，下调Bax和FLIP蛋白表达，上调Bcl-2的蛋白表达。
　　结论：黄芩素能预防D-GalN/LPS诱导小鼠急性肝衰竭的发生,减轻肝脏损伤，其作用其机制可能是为清除自由基，抗氧化；降低肝组织中 MDA含量，增加GSH、SOD、CAT、GSH-Px活性发挥抗脂质过氧化，从而保护肝细胞，减少肝细胞变性、坏死；通过抑制NO合成减轻肝损伤；通过下调Bax、FLIP蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达介导细胞凋亡。黄芩素预防D-GalN/LPS引起的肝衰竭可能通过调节抗氧化水平以及调控相关细胞因子。

目录

声明

前言

第一章 黄芩苷黄芩素抗氧化清除自由基研究

1.1实验材料

1.2 仪器设备

1.3 实验方法

1.4 结果

1.5 讨论

第二章D-GalN/LPS诱导小鼠急性肝衰竭模型建立

2.1 实验动物与材料

2.2 主要仪器

2.3 实验方法

2.4实验结果

2.5 讨论

第三章 黄芩素对D-GalN/LPS诱导急性肝衰竭的保护作用

3.1 实验动物与材料

3.2 主要仪器

3.3 实验方法

3.4结果

3.5 讨论

第四章 结 论

参考文献

致谢

综述：黄芩素的药理研究进展