应用微卫星DNA标记对延边圈养黑熊进行亲子鉴定和遗传多样性研究

摘要

黑熊，也称亚洲黑熊，别名狗熊、黑瞎子、月牙熊，是现代生存的陆生食肉目动物中体形最大者。黑熊原来没有被列入保护动物目录，在一些地区还被列为害兽，由于其经济价值和药用价值，经常有人进山猎杀，或捕捉后进行人工繁殖。随着野生种群的不断减少，我国现已将其列为国家二级保护动物，世界各地的学者也都逐渐开展了对熊的研究。随着养殖规模的壮大，为了进一步了解我国存在的黑熊亚种的遗传性状，更好的推动养熊业科学、规范管理，本研究选取19头成年黑熊，通过比较三个不同来源的模板DNA和其浓度对微卫星位点扩增效果的影响，找出适合于微卫星位点扩增的模板DNA浓度，探讨使用毛发作为样本材料进行遗传多样性研究的可行性。利用15对黑熊微卫星标记对延边地区繁殖的圈养黑熊115个个体进行了微卫星多态性测定和统计分析，并对延边地区养殖黑熊进行了亲子鉴定的研究，结果如下：
　　1.毛发根部DNA、血液DNA和组织DNA的PCR产物数量和质量并无明显差异。利用非损伤性采样法，收集100根带有毛囊的毛发可满足微卫星位点扩增模板DNA需求量，50ng/μL的模板DNA浓度为微卫星位点扩增反应的最佳模板浓度，本研究结果进一步证明毛发根部DNA可作为黑熊遗传多样性研究的试验材料。
　　2.本研究从19个微卫星位点中筛选出15个位点进行遗传多样性分析，在黑熊养殖群体中共检测到111个等位基因，每个微卫星位点的等位基因数量为4-11个，平均每个位点7.40个，基因频率分布在0-1之间，说明黑熊养殖群体的遗传多样性比较丰富。
　　3.15个微卫星位点的PIC值在0.4533-0.7422之间，平均值为0.6133，其中只有ABB1、ABB3、ABB7、UT36的PIC值处于0.25与0.5之间，属于中度多态性位点，其余均高于0.5，15个位点平均期望杂合度为0.6213，说明所选标记具有丰富的多态性，能够在分子水平上准确的反映黑熊物种的遗传关系。
　　4.利用15个微卫星标记进行了亲子鉴定研究，分别找出了14头仔熊的亲本父母，亲权鉴定的累积非父排除概率和亲权指数较高，累积非父排除概率达0.999985，亲权相对机会范围是99.9473％-99.9993%。

目录

声明

第一章 前 言

1 熊科动物的研究背景及现状

2 非损伤性取样法的研究进展

3 动物遗传多样性的研究

4 分子标记在圈养濒危野生动物研究中的应用

5 基因组扫描的基本原理和方法

6 亲权鉴定

7 本研究的目的及意义

第二章 黑熊不同基因组DNA模板来源的比较研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 利用微卫星标记分析延边圈养黑熊遗传多样性

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第四章 利用微卫星标记进行延边圈养黑熊亲缘关系的研究

1 材料和方法

2 结果

3 讨论

4 小结

结论

参考文献

作者简介

致谢

攻读学位期间发表的学术论文