长白山野生食用菌的抗肿瘤活性研究

摘要

目的：
　　我国是世界上最早食用并栽培食用菌的国家,是食用菌生产第一大国，具有源远流长的历史文化。我国目前已发现野生的食用菌有850余种,但只有少数品种开发利用,未开发的野生食用菌占绝大多数。现代科学已经能够从分子水平上证实食用菌的特殊营养保健功能及其药用价值,食用菌类食品以其天然、安全、富有营养、具有调节人体多项生理功能而赢得越来越多人的青睐。长白山位于吉林省东南部，地域辽阔，森林覆盖率高并且雨量充沛、气候适宜，野生食用菌资源十分丰富，且种类繁多，是一座天然的“野生食用菌资源的立体宝库”。本论文对长白山野生食用菌的抗肿瘤活性进行研究，为继续开发长白山野生食用菌的保健作用提供理论依据。
　　方法：
　　1.为研究长白山野生食用菌抗肿瘤活性，本试验以灵芝、桑黄、猴头蘑、桦褐孔菌和香菇等野生食用菌为研究对象，首先将五种菌粉碎，将粉末浸泡在10倍量的70％乙醇中24 h，加热回流提取2次，每次2 h，趁热过滤，合并两次过滤，放置，回收乙醇，冷冻干燥备用；
　　2.细胞毒性实验：以灵芝、桑黄、猴头蘑、桦褐孔菌、香菇的70%醇提物为药物，配制药物浓度为0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL，以人体肝癌细胞HepG2、人体子宫宫颈癌细胞HeLa、人体乳房癌细胞MCF-7、人体胃癌细胞 AGS、人体肺癌细胞 A549和人体正常肾脏细胞293为实验细胞进行MTT实验测定以上五种食用菌的抑制肿瘤细胞生长的效果；
　　3.体外抗肿瘤实验：以灵芝、桑黄、猴头蘑、桦褐孔菌、香菇的70%醇提物为药物，配制药物浓度为0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、0.75 mg/mL、1 mg/mL，以人体肝癌细胞HepG2、人体子宫宫颈癌细胞HeLa、人体乳房癌细胞MCF-7、人体胃癌细胞AGS、人体肺癌细胞A549为实验细胞进行MTT实验测定以上五种食用菌的抑制肿瘤细胞生长；并利用小鼠S-180移植性肿瘤方法对以上食用菌的抗肿瘤作用进行研究，随机分成空白对照组、五种菌高、中、低剂量组分别按250、125、25 mg/kg剂量灌胃给药，每天一次，空白对照组每天灌胃蒸馏水0.1 mL/10g，连续给药12天。末次给药后24 h，处死动物，解剖剥离瘤块，称瘤重，计算肿瘤生长抑制率。
　　结果：
　　1.体外抗肿瘤试验：灵芝、桑黄、猴头蘑、桦褐孔菌、香菇70%乙醇提取物具有较高的抑制肿瘤细胞生长效果。人体子宫宫颈癌细胞（HeLa）在试剂浓度为1.0 mg/mL条件下，灵芝、猴头蘑和香菇表现出对70%以上的癌细胞生长抑制效果，尤其是灵芝的浓度在0.75 mg/mL条件能达到81.0%的高生长抑制效果。另外试剂浓度为1.0 mg/mL时，对人体肝癌细胞HepG2生长抑制效果，猴头蘑和灵芝分别为76.3%和71%。对人体乳房癌细胞MCF-7细胞毒性试剂最高浓度为1 mg/mL桑黄的最高生长抑制率为81.5%，猴头蘑和桦褐孔菌的抑制率分别为76.6%和75.1%。在同一试剂浓度下，香菇和灵芝对人体胃癌细胞AGS的癌细胞生长抑制效果分别为88.7%和87.0%。各蘑菇对人体癌细胞生长抑制效果随着试剂浓度增加而增加。
　　2.灵芝对人体子宫宫颈癌细胞HeLa在药物浓度为0.75 mg/mL时抑制率为70%以上，药物浓度为1 mg/mL时抑制率为83%。本实验说明灵芝等五种野生食用菌对特定癌细胞具有较高的生长抑制效果。另外药物浓度为1 mg/mL时桑黄对HeLa的抑制率为65%。在药物浓度为1 mg/mL时猴头蘑对HeLa的抑制率为76.4%，同一浓度下桦褐孔菌对HeLa的抑制率为78.5%。同样在药物浓度为1 mg/mL时香菇对HeLa的抑制率为75%，五种食用菌对癌细胞的抑制率随着浓度增加呈依存关系。
　　在药物最高浓度为1 mg/mL时，五种野生食用菌对癌细胞HeLa的细胞毒性都在70%以上，对人体肾脏正常细胞的细胞毒性低于40%。这种药物对癌细胞生长有较高的抑制作用，但是对正常细胞有较低的细胞毒性。
　　3.五种野生食用菌乙醇提取物的体内抗癌效果利用 Sarcoma-180肿瘤细胞进行验证。实验结果说明对S-180移植性肿瘤生长也有明显的抑制作用。
　　结论：
　　1.野生食用菌的70%乙醇提取物均具有一定的抑制肿瘤细胞生长的能力，并且随着浓度的增大而增强。
　　2.野生食用菌的70%乙醇提取物对肿瘤细胞有毒性作用，而对正常细胞有较低的毒性。
　　3.野生食用菌的70%乙醇提取物均能有效抑制移植性S-180小鼠肉瘤的生长。

目录

声明

第一章 绪论

第二章 材料与方法

2.1试验材料

2.2试剂

2.3 试验仪器

2.4 试验动物

2.5 试验用癌细胞株

2.6 细胞培养

2.7 相关溶液的配制

2.8实验方法

2.9 统计学方法

第三章 结果

3.1野生食用菌提取物体外抗肿瘤的MTT试验结果

3.2野生食用菌提取物体外的MTT细胞毒性试验结果

3.3 体内抗癌效果

第四章 讨论

4.1 五种野生食用菌的抗肿瘤作用

第五章 结论

参考文献

致谢

综述：长白山野生食用菌的功能性应用现状