低密度脂蛋白受体相关蛋白4诱导小鼠重症肌无力相关细胞因子的检测

摘要

目的:通过建立小鼠实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmunemyasthenia gravis，EAMG)模型，以研究低密度脂蛋白受体相关蛋白4(lowdensity lipoprotein receptor-related protein4，LRP4)在重症肌无力(myastheniagravis，MG)致病性，以及与相关细胞因子的关系。
　　方法:选取10只8周龄雌性C57BL/6小鼠，体重为18-25g，随机分为实验组(n=5)和对照组(n=5)。采用主动免疫的方式皮下注射LRP4，以建立小鼠EAMG模型。取小鼠腓肠肌制成冰冻切片，用四甲基罗丹明结合的银环蛇毒素(TR-BTX)定位乙酰胆碱受体(AChR)（呈红色），用FITC结合的羊抗小鼠IgG抗体去定位LRP4抗体（呈绿色），再通过激光共聚焦显微镜来观察超微结构的变化。用ELISA试剂盒分别测定实验组和对照组小鼠血清血清中细胞因子IL-12、IFN-γ、 IL-17的浓度。
　　结果:实验组中有一只小鼠左眼周边脱毛，无法睁开，实验组中部分小鼠表现为活动迟缓，撕咬抓取能力变弱，体重略微下降。通过激光共聚焦显微镜观察，实验组腓肠肌的细胞膜表面呈现绿色荧光，再相同的部位呈红色荧光，表明抗LRP4-Ab已经与LRP4抗原结合，并且结合在神经肌肉接头处(neuromuscularjunction，NMJ)。检测的细胞因子IL-12、IFN-γ、IL-17，实验组细胞因子均表现为分泌水平增多，但是通过spss170进行统计学分析，发现实验组与对照组之间没有明显差异(P＞0.05)。
　　结论:初步证明LRP4可以诱导C57BL/6小鼠EAMG，LRP4抗体是EAMG的致病性抗体之一;不能直接说明IL-12、IFN-γ、IL-17与LRP4-MG致病性之间的相关。

目录

声明

摘要

中英文对照

第一章 前言

第二章 实验材料

2．1 实验动物

2．2 主要实验仪器

2．3 实验试剂

第三章 实验方法

3．1 小鼠EAMG模型的建立

3．1．3 小鼠眼球取血

3．2 免疫荧光试验

3．2．1 冰冻切片的制备

3．2．2 免疫荧光染色及观察

3．3 血清中IL-12、IFN-γ、IL-17浓度的检测

3．4 统计学方法

第四章 结果

4．1 小鼠的临床表现

4．2 EAMG模型临床评分

4．3 小鼠体重的变化

4．4 免疫荧光观察

4．5 血清中IL-12的浓度

4．7 血清中IL-17的浓度

第五章 讨论

结论

参考文献

致谢