肌肉生长抑制素基因敲除猪基因鉴定及生理指标的检测

摘要

肌肉生长抑制素(Myo statin，MSTN)是近几年来发现的骨骼肌生长的负调控因子，其活性的丧失，会引起动物肌肉的过度发育，肌纤维直径变大或肌纤维数增加，表现为动物的“双肌”性状。在小鼠、狗、牛和人类中MSTN突变的个体均表现出骨骼肌过度发育的表型。本研究对基因组定点编辑技术与体细胞克隆技术结合获得的MSTN基因单侧突变（MSTN+/-）和双侧突变(MSTN-/-)的猪进行生理生化指标等检测，为基因改良瘦肉型品种猪的培育提供基础性数据。
　　研究内容及结果主要包括以下几个方面:
　　为了鉴定在基因敲除猪中MSTN基因表达及观察其表达水平的变化，采用逆转录(Reverse Transcription PCR，RT-PCR)的方法，检测MSTN，卵泡抑素(Follistatin)，核心蛋白多糖(Decorn)，以及可溶性受体ActRⅡ B在背最长肌与股二头肌中的表达情况。MSTN基因缺失后，Follistatin、Decorin与ActRⅡB在MSTN+/-猪与MSTN-/-猪背最长肌中均有不同程度表达;在MSTN+/-猪的股二头肌中除Follistatin只有少量表达以外，Decorin与ActRⅡB均无表达，Follistatin、Decorin与ActRⅡB在MSTN-/-猪股二头肌中均无表达。
　　经过对三种猪即野生型WT、MSTN+/-和MSTN-/-猪的血液检测及分析，发现野生型猪（18.4±0.55）与MSTN+/-猪（12.25±0.32）、MSTN-/-猪白细胞总数（12±0.15）比较各有显著性差异(P＜0.05);但是MSTN基因敲除猪之间比较白细胞总数无显著性差异(P＞0.05);野生型猪（22±1.95）、MSTN+/-猪（15.9±0.92）与MSTN-/-猪中性粒细胞百分比(18.7±1.72)比较结果表明三者互相均有显著性差异(P＜0.05)。
　　采取三种猪的尿液进行检测后发现三组猪的尿胆原含量、潜血含量、蛋白质含量与白细胞含量均显示为可忽略的疑似阳性反应（“±”号）;其余胆红素、酮体、亚硝酸盐、葡萄糖含量均显示为阴性反应，表明数值完全正常，并且尿液pH值均在正常范围内(pH=7.0)。
　　综上所述，虽然在上述指标中部分血液指标在MSTN基因敲除猪与野生型猪之间存在显著的差异，但是所有指标均在健康猪正常范围内。因此初步判定MSTN基因敲除猪与该同种野生型猪的指标均为正常。

目录

声明

摘要

前言

1 肌肉生长抑制素的研究进展

2 关于敲除MSTN基因的研究

3 MSTN基因缺失动物安全性检测的应用

3．1 MSTN缺失动物RNA水平检测

3．2 动物血液生理指标检测

3．3 动物尿液指标检测

4 试验目的及意义

1 材料

1．1 试验材料

1．2 试验药品与器材

1．3 测定指标

2 方法

2．1 试验猪背最长肌和股二头肌的MSTN及相关基因检测方法

2．2 血液指标检测方法

2．3 尿液指标检测方法

2．4 统计

1．1 在野生型猪与MSTN基因敲除猪背最长肌与股二头肌中MSTN基因的鉴定情况

1．2 在野生型猪与MSTN基因敲除猪背最长肌与股二头肌中Follistatin的表达水平

1．3 在野生型猪与MSTN基因敲除猪背最长肌与股二头肌中Decorin的表达水平

1．4 在野生型猪与MSTN基因敲除猪背最长肌与股二头肌中ActRⅡB的表达水平

2 野生型猪、MSTN+／-与MSTN-／-猪血液生理指标比较

3 野生型猪、MSTN+／-与MSTN-／-猪尿液指标

讨论

1 MSTN基因敲除对相关基因影响

2 MSTN基因敲除对猪血液指标的影响

3 MSTN基因敲除对猪尿液指标的影响

4 MSTN对猪的的影响

结论

参考文献

致谢

作者简介