TNF-α致新生SD大鼠神经干细胞凋亡作用的实验研究

摘要

本课题在体外成功分离、培养和鉴定新生SD大鼠NSC的基础上，研究了TNF-α对NSC的致凋亡作用，为临床应用NSC进行替代治疗提供实验基础，做出有益探索。 研究分为两个部分： 一、新生SD大鼠NSC的体外分离培养与鉴定 目的:探讨从出生1-3天的SD大鼠中枢神经系统组织中分离、培养与鉴定NSC的方法，观察其在体外增殖的特点。 方法:采用机械分离法处理新生大鼠中枢神经组织，用无血清培养技术悬浮培养NSC，神经巢蛋白(Nestin)染色鉴定。定量观察不同代数NSC克隆球中NSC的比例，台盼蓝法观察干细胞增殖情况。同时进行NSC冻存和复苏的研究。 结果:不同代数的细胞悬液中均出现大量有增殖能力的NSC，可形成神经球。3代以后的克隆球中Nestin阳性细胞的比例较原代增高(P<0.05)，增殖能力也较强。NSC在-170℃深低温冻存下保存60天，复苏后的细胞存活率达70％以上。 结论:证实从新生SD大鼠中枢神经组织中分离培养的悬浮细胞是具有自我更新和增殖能力的NSC。在-170℃深低温冻存下，NSC能在体外保存较长时间，复苏的NSC仍能保持干细胞原有的特性。 二、TNF-α对NSC凋亡的影响作用 目的:观察TNF-α对新生SD大鼠NSC凋亡的影响作用，探讨致凋亡作用的机制。 方法:将体外培养的第3代NSC以相同密度分成正常组和干预组，以不同作用浓度的TNF-α将干预组又分为3个亚组，分别于培养后的12h、24h、48h、72h用MTT法测定NSC的存活率，TUNEL、FCM法定性、定量观察NSC的凋亡情况。 结果:TNF-α的浓度>0.5ng/ml，相同作用时间下的干预组NSC无论存活率、凋亡数量及凋亡率均较正常对照组明显增高(P<0.05)。相同作用浓度(TNF-α>0.5ng/ml)的干预组内作用时间长的(>24h)干细胞凋亡数量与作用时间短的相比均有统计学差异(P<0.05)。其余干预组(TNF-α<0.5ng/ml)则无此差异。 结论:TNF-α对NSC具有致凋亡的作用。其中，浓度可能是影响致凋亡作用的重要因素。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

第一章新生SD大鼠NSC的体外分离培养与鉴定

1.1前言

1.2材料和方法

1.3实验结果

1.4分析讨论

1.5小结

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第二章TNF-α对NSC凋亡的影响作用

2.1前言

2.2材料和方法

2.3实验结果

2.4分析讨论

2.5小结

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结论

参考文献

综述 神经干细胞的研究进展

致谢

攻读学位期间主要的研究成果