过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体对垂体腺瘤生长的影响及其作用机制的研究

摘要

第一章过氧化物酶体增殖物激活受体γ在人垂体腺瘤中的表达情况及其与垂体腺瘤侵袭性的关系 目的:检测过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPARγ)蛋白和mRNA在人各种类型垂体腺瘤组织中的表达情况，研究它们之间的相关关系。 方法:分别应用免疫组织化学染色方法(Immunohistochemistry，IHC)和逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR)检测78例垂体腺瘤组织中PPARγ蛋白和33例垂体腺瘤组织中mRNA的表达情况。然后比较PPARγ在正常垂体与垂体腺瘤之间；各种不同内分泌类型的垂体腺瘤之间；以及侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤之间表达情况的差异。 结果 1、免疫组织化学染色显示，PPARγ蛋白主要分布于细胞浆中，细胞核内少量表达。 2、PPARγ蛋白在侵袭性垂体腺瘤组织中表达的阳性率为68.09％(32/47)，在非侵袭性垂体腺瘤组织中表达的阳性率为38.71％(12/31)，两者比较，X<'2>=6.56，P<0.05。 3、PPARγmRNA在正常垂体组织中的表达水平为1.547±0.252，在垂体腺瘤组织中的表达水平为2.988±0.183，两者比较，t=2.333，P<0.05。与正常垂体组织相比，ACTH腺瘤、混合型腺瘤和FSH/LH腺瘤组织中PPARγmRNA的表达水平明显增高，P<0.05；而无功能性腺瘤、GH腺瘤和PRL腺瘤则没有显著差异，P>0.05。 4、PPARγmRNA在侵袭性垂体腺瘤组中的表达水平为3.947±0.431，在非侵袭性垂体腺瘤组中的表达水平为2.402±0.240，两者相比，差异有统计学意义(t=3.132，P<0.01)。 5、对无功能腺瘤、混合型腺瘤和FSH/LH腺瘤，侵袭组PPARγmRNA的表达水平分别为4.796±0.541、2.778±0.509和6.065±1.040，而相应非侵袭组的表达水平分别为2.625±0.494、1.259±0.169和2.640±0.447，两者比较，P<0.05。对GH腺瘤和PRL腺瘤，侵袭组与非侵袭组之间PPARγmRNA的表达水平无显著差异，P>0.05。 结论: PPARγ作为核受体超家族的成员，被认为在肿瘤的发生、生长和侵袭过程中起重要作用。PPARγ在垂体腺瘤中的表达明显高于正常垂体组织，在侵袭性垂体腺瘤中的表达明显高于非侵袭组，提示它有可能作为垂体腺瘤治疗的一个新靶点，为PPARγ配体治疗垂体腺瘤提供了实验依据。 第二章 PPARγ激动剂曲格列酮和15-Deoxy-△<'12,14>-Prostaglandin J<,2>对垂体腺瘤细胞生长和激素分泌的抑制作用及其作用机制的研究 目的:探讨PPARγ合成激动剂曲格列酮和天然激动剂15-Deoxy-△<'12,14>-prostaglandin J<,2>(15d-PGJ<,2>)对垂体腺瘤细胞的生长和生长激素(growth hormone，GH)分泌的影响及其可能的作用机制。 方法:体外培养大鼠生长激素型垂体腺瘤细胞系GH3，经不同浓度的曲格列酮和15d-PGJ<,2>干预不同时间后，进行以下实验： 1．MTT法观察其生长效应； 2．采用ELISA法检测细胞培养基中的GH含量变化； 3．采用电镜观察细胞凋亡表现； 4．采用流式细胞仪(FCM)进行细胞周期分析(PI染色)； 5．采用Western blot方法检测凋亡相关基因caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平的变化。 结果 1．与对照组相比，不同浓度的曲格列酮和15d-PGJ<,2>干预48和96小时后，GH3细胞生长受到抑制，呈现剂量和时间依赖性效应； 2．与对照组相比，不同浓度的曲格列酮和15d-PGJ<,2>对GH3细胞的基础GH分泌有抑制作用，亦呈现剂量和时间依赖性效应； 3．透射电镜扫描观察到干预后的细胞形态变圆，微绒毛明显消失、减少，胞浆浓缩，细胞核出现边褶，染色质固缩，细胞膜内陷分割细胞，出现凋亡小体等典型的凋亡形态学表现； 4．FCM检测发现曲格列酮和15d-PGJ<,2>可减低GH3细胞的G<,2>期和S期的细胞比例，而G<,1>期的细胞比例明显增加； 5．western blot分析显示曲格列酮和15d-PGJ<,2>干预后，凋亡相关基因中Bax和caspase-3蛋白表达水平明显增加，而Bcl-2蛋白表达水平下调，且表现出剂量依赖效应关系。 结论 1．PPARγ激动剂曲格列酮和15d-PGJ<,2>可抑制垂体腺瘤细胞生长和垂体腺瘤细胞的激素分泌，且表现出剂量和时间依赖性效应。 2．PPARγ激动剂曲格列酮和15d-PGJ<,2>干预后导致细胞周期停滞，使进入G<,2>/S期的细胞减少，G<,0>/G<,1>期细胞增多，诱导垂体腺瘤细胞凋亡；细胞凋亡相关基因Bax和caspase-3蛋白表达增加，而Bcl-2蛋白表达下调。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词

声明

第一章过氧化物酶体增殖物激活受体γ在人垂体腺瘤组织中的表达情况及其与垂体腺瘤侵袭性的关系

1.1前言

1.2材料与方法

1.3结果

1.4讨论

小结

第二章：PPARγ激动剂曲格列酮和15-Deoxy-△12,14-Prostaglandin J2对垂体腺瘤细胞生长和激素分泌的抑制作用及其作用机制的研究

2.1前言

2.2材料与方法

2.3结果

2.4讨论

小结

总结

参考文献

综述一过氧化物酶体增殖物激活受体-γ与肿瘤发生、发展的关系

综述二神经细胞黏附分子的研究概况

致谢

攻读学位期间主要的研究成果