泻火补肾汤对脑出血后神经干细胞移植大鼠脑内TGF-β1和VCAM-1表达的影响

摘要

研究背景：脑出血(Intracerebral Hemorrhage，ICH)是临床常见危重病，其发病率、致残率、死亡率都很高，给人类健康和社会带来了巨大的损失。当颅脑损伤时，静止的内源性中枢神经干细胞激活增殖，但其数目有限，不足以修复脑出血后神经损伤；而且目前医学界尚无治疗脑出血的特效药物。神经干细胞(neural stem cells，NSCs)具有自我更新和向神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞分化的能力，且有潜在的向病灶的迁移能力。尤其是神经干细胞系的建立可以大量地提供神经元和胶质细胞，为损伤后进行替代治疗提供了充足的材料，因此NSCs替代治疗给脑出血后神经系统损伤带来了康复的希望，在脑出血的治疗中具有重要的战略意义。传统的观点认为，由于血脑屏障的存在，大脑为免疫豁免区。但是在脑出血后进行NSCs移植时，血脑屏障损伤，产生大量的炎性介质、抗体和免疫活性物质，诱导细胞表达MHC分子。而且体外分离培养后的NSCs具有特征免疫原性，因此如何降低移植排斥反应成为NSCs移植中的研究焦点之一。 目的：TGF-β1具有强大的免疫抑制作用，VCAM-1是一种与免疫相关的重要的粘附分子。本试验研究通过研究中药泻火补肾汤对NSCs移植后对大鼠脑内TGF-β1和VCAM-1表达的影响，从免疫角度探讨泻火补肾汤诱导免疫耐受的作用及机制，为NSCs替代治疗时降低免疫排斥提供实验基础。 方法：取群体反应性抗体阳性SD大鼠260只随机分成两批，每批随机分成6组，正常组5只，其余各组均25只，均于术后的2d,4d,7d,14d,28d五个时间点收集标本进行指标检测。分组为：正常对照组(A组)，假手术组(B组)，模型组(C组)、模型治疗组(D组)、移植组(E组)、移植治疗组(F组)。C、D、E、F用Ⅶ型胶原酶复制脑出血模型，B组用生理盐水代替胶原酶，A组不造模。神经干细胞培养：分离初生SD大鼠海马神经干细胞，体外培养，传代。神经干细胞移植：神经干细胞鉴定后移植入E、F两组大鼠脑室下区。给药：D、F两组行泻火补肾汤灌胃。用逆转录.聚合酶链反应检测术后2d、4d、7d、14d、28d TGF-β1mRNA和VCAM-1mRNA的表达，用免疫组化方法检测TGF-β1和VCAM-1蛋白的表达。 结果： 1.TGF-β1mRNA表达特点：正常组TGF-β1mRNA有少量表达。2d时B、C、D、E、F五组TGF-β1mRNA表达较A组升高，其中F组表达最强(P<0.01)。4d时可见B、C、D、E四组TGF-β1mRNA表达高峰(P<0.05)，7d、14d逐渐下降(P<0.05)，28d基本恢复正常。F组4d时TGF-β1mRNA表达较2d未见明显变化，7d、14d逐渐下降(P<0.05)，28d较14d回升(P<0.05)。同时间点比较，F组比E组、D组比C组TGF-β1mRNA表达增高(P<0.05)。 2.VCAM-1mRNA表达特点：正常组VCAM-1mRNA仅有极少量表达。2d时B、C、D、E、F五组VCAM-1mRNA表达达到高峰(P<0.05)，其中E组表达最强(P<0.01)。B组7d VCAM-1mRNA表达基本正常，C、D、E、F组7d、14dVCAM-1mRNA表达逐渐下降(P<0.05)，直到28d基本恢复正常。同时间点比较，F组比E组、D组比C组VCAM-1mRNA表达明显减弱(P<0.05)。 3.TGF-β1蛋白表达特点：正常脑组织见少量阳性细胞表达。B、C、D、E各组术后2d可见阳性细胞增多，4d达到高峰(P<0.05)，7d、14d逐渐减少(P<0.05)，28d基本恢复正常。F组2d时染色阳性细胞最多，4d未见明显变化，7d，14d逐渐减少，28d较14d回升(P<0.01)。同时间点比较，F组比E组、D组比C组TGF-β1表达增强(P<0.05)，阳性细胞主要分布于血肿周边、脑室下区，根据形态判断主要为神经元，小胶质细胞，巨噬细胞等。 4.VCAM-1蛋白表达特点：正常脑组织见少量阳性细胞弥散分布，各组术后2d可见阳性细胞表达高峰(P<0.05)，之后阳性细胞逐渐减少。各组各时间点中E组VCAM-1阳性细胞表达最多(P<0.05)。同时间点比较，F组比E组、D组比C组VCAM-1表达减弱(P<0.05)。染色阳性的细胞多为不规则的血管内皮细胞，主要分布于血肿周边，脑室下区。 结论： 1.脑出血后大鼠TGF-β1和VCAM-1表达上调，提示脑出血后脑内存在炎性反应。 2.脑出血后大鼠神经干细胞移植后出现TGF-β1和VCAM-1表达上调，说明移植后免疫反应增强。 3.中药泻火补肾汤可诱导移植时的免疫耐受，从而降低NSCs移植后的排斥反应，可能与上调TGF-β1、下调VCAM-1表达有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词汇集表

声明

第一章前言

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

综述 TGB-β1在移植免疫中的作用及研究进展

致谢

在校期间科研成果及发表论文