血管紧张素转换酶抑制剂对醛糖还原酶的抑制作用

摘要

醛糖还原酶（aldose reductase，AR），是治疗糖尿病并发症的靶位酶。醛糖还原酶抑制剂（aldose reductase inhibitor，ARI）通过抑制多元醇通路有效地防治糖尿病并发症。血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI，angiotensin-converting enzyme inhibitors）是目前能有效逆转高血压心血管重塑的药物，ACEI也可能通过抑制AR发挥逆转心血管重塑的作用，但国内外均未见相关研究报道。 目的：旨在查明ACEI类药物卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利对醛糖还原酶的作用以及卡托普利、赖诺普利对SHR大鼠心肌AR活性的影响。 方法： （1）从牛眼晶状体中提取制备醛糖还原酶，采用优化的测定方法测定醛糖还原酶活性。采用Brad-ford染色法测定AR粗酶蛋白质浓度，Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析AR粗酶。以DL-甘油醛为底物，NADPH为辅酶，首先将除底物DL-甘油醛以外的其它组分混合，置于25℃保温10分钟，然后加入5 mmol·L-1底物DL-甘油醛启动酶促反应，在25℃下连续监测340 nm处反应体系吸光度的变化5分钟。规定25℃下反应体系吸光度每分钟下降0.001为一个酶活力单位（AU）。以不含底物的样品为空白对照。我们维持其它组分浓度不变，分别改变NADPH的浓度、底物DL-甘油醛的浓度、AR酶量，观察它们对醛糖还原酶酶促反应体系的影响。 （2）体外实验以依帕司他为阳性对照，比较卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利对醛糖还原酶的抑制作用。采用优化的醛糖还原酶酶促反应体系测定AR活性。 （3）在体实验，紫外分光光度法测定卡托普利、赖诺普利对SHR心肌AR活性的影响。18只SHR随机分为3组，每组6只：蒸馏水（阴性对照）、卡托普利（50 mg·kg-1·d-1）、赖诺普利（20 mg·kg-1·d-1），采用放射免疫法测定血浆中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量。 结果：1.NADPH浓度、底物DL-甘油醛浓度、AR酶量均可影响醛糖还原酶的催化活性。优化后醛糖还原酶酶促反应体系为：NADPH浓度为0.25 mmol·L-1、底物DL-甘油醛浓度为2 mmol·L-1、AR（浓度为41μg·μL-1），酶量为40μL。2.体外研究表明卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利均对AR活性有抑制作用，且有量-效关系。与阴性对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。3.在体研究表明，卡托普利和赖诺普利喂养的SHR大鼠心肌中AR活性值分别为0.032±0.012和0.042±0.010 AU，与对照组（0.092±0.010）AU相比较，活性下降显著，差异均有统计学意义（P<0.05）；且AR活性与AngⅡ浓度具有相关性（R=0.695，P=0.004）。 结论： 1.建立了优化的醛糖还原酶活性测定方法。 2.血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利、赖诺普利、贝那普利、雷那普利均可抑制AR活性。

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文摘

英文文摘

声明

第一章 醛糖还原酶活性测定方法的建立与优化

前言

1.仪器、试剂、溶液配制

1.1 仪器

1.2试剂

1.3溶液配制

1.4其它材料

2.实验方法

2.1醛糖还原酶的初步提取、分离和保存

2.2 Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.3 Brad-ford染色法测定蛋白浓度

2.4醛糖还原酶(AR)酶活性测定方法的建立

2.5 ACEI类制剂初筛样品的制备

2.6醛糖还原酶抑制剂的筛选

3.结果与讨论

3.1醛糖还原酶的初步提取、分离和保存

3.2 Brad-ford染色法测定AR粗酶蛋白质浓度

3.3 Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析AR租酶

3.4醛糖还原酶(AR)酶活力测定方法的建立

3.5醛糖还原酶(AR)酶促反应体系的优化

第二章 血管紧张素转换酶抑制剂对醛糖还原酶的抑制作用

前 言

1.实验仪器、材料

1.1 仪器

1.2试剂

1.3溶液配制 同第一部分

2.实验动物

3.实验方法

3.1 ACEI对醛糖还原酶的抑制作用

3.2卡托普利、赖诺普利对高血压心肌组织AR活性及血浆活性物质Ang Ⅱ浓度的影响

4. 结果

4.1 ACEI对醛糖还原酶抑制作用的研究

4.2卡托普利、赖诺普利对高血压心肌组织AR活性的影响

5.讨论

参考文献

醛糖还原酶抑制剂的研究进展

攻读学位期间的主要研究成果

致 谢