二茂铁衍生肽的合成、表征及其与β-淀粉样蛋白的相互作用

摘要

以二茂铁为起始原料，采用液相合成法得到两种目标产物：二茂铁-三肽（化合物10，Boc-Gly-Pro-Arg（NO2）-Fc-COOMe，GPR-Fca，总收率为7.25％，Fc为二茂铁）和二茂铁-五肽（化合物17，Fc-Leu-Pro-Phe-Phe-Asp（OMe）-OMe，Fc-iAβ5，总收率为17.86％）；并同时采用液相和固相合成法分别合成Aβ抑制剂：三肽（化合物11，Boc-Gly-Pro-Arg（NO2）-OMe，GPR）和五肽（化合物19，Ac-Leu-Pro-Phe-Phe-Asp-OH，iAβ5）；用红外光谱（IR）、紫外-可见吸收光谱（UV-Vis）、核磁共振氢谱（1H NMR）和质谱（MS）等方法对合成中各步产物进行了表征。 采用原子力显微镜（AFM）、硫代黄色素（ThT）荧光光谱和电化学等方法研究了近生理条件下各种抑制剂与β-淀粉样蛋白（Aβ42）的相互作用。原子力显微镜实验结果表明，GPR-Fca与Aβ42之间存在特异性相互作用，能有效地阻止Aβ42纤维化。硫代黄色素（ThT）荧光光谱实验结果表明，GPR-Fca抑制和分解Aβ42纤维的效果都要优于GPR，并且5倍量比的GPR-Fca对Aβ42具有良好的抑制和分解效果。利用电化学方法实时检测并证实了GPR-Fca与Aβ42之间的相互作用。原子力显微镜结果证实了iAβ5是种有效的寡肽类Aβ抑制剂，能有效地抑制Aβ42的聚集。硫代黄色素（ThT）荧光光谱实验结果表明，Fc-iAβ5能有效地抑制Aβ42纤维的形成，并且能有效地分解已形成的Aβ42纤维，其抑制和分解Aβ42纤维的效果都要优于iAβ5。

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文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1二茂铁

1.1.1二茂铁的结构及性质

1.1.2二茂铁衍生物的生物(理)活性

1.2老年性痴呆

1.2.1老年性痴呆病因

1.2.2 β-淀粉样蛋白的研究

1.3多肽抑制剂

1.3.1 GPR三肽

1.3.2 iAβ5五肽

1.4多肽

1.4.1多肽研究进展

1.4.2多肽合成基本原理

1.4.3多肽合成方法

1.4.4多肽的固相合成

1.4.5多肽的应用

1.5蛋白与多肽相互作用的研究方法

1.5.1电化学分析法

1.5.2紫外可见吸收光谱法

1.5.3荧光光谱法

1.5.4圆二色谱(CD)法

1.5.5核磁共振法

1.5.6微量热法

1.5.7其他方法

1.6本论文的选题思路

第二章GPR-Fea和GPR的合成及与Aβ42的相互作用

2.1引言

2.2主要试剂及仪器设备

2.3实验方法

2.3.1薄层色谱法

2.3.2柱色谱法

2.3.3化合物的表征方法

2.3.4样品配制

2.3.5原子力显微镜(AFM)测试

2.3.6ThT荧光光谱测定

2.3.7电化学方法

2.4目标产物的合成

2.4.1合成路线

2.4.2化合物1，1'-二茂铁二乙酮(1)的合成

2.4.3化合物1，1'-二茂铁二甲酸(2)的合成

2.4.4化合物1，1'-二茂铁二甲酸甲酯(3)的合成

2.4.5化合物1'-甲酸甲酯-1-甲酸二茂铁(4)的合成

2.4.6化合物1'-甲酸甲酯-1-叠氮羰基二茂铁(5)的合成

2.4.7化合物1'-甲酸甲酯-1-叔丁基氧氨基二茂铁(6)的合成

2.4.8化合物1'-甲酸甲酯-1-氨基二茂铁(7)的合成

2.4.9化合物Boc-Arg(NO2)-Fc-COOMe(8)的合成

2.4.10化合物Boc-Gly-Pro-OMe(9)的合成

2.4.11化合物Boc-Gly-Pro-Arg(NO2)-Fc-COOMe(10)的合成

2.4.12化合物Boc-Gly-Pro-Arg(NO2)-OMe(11)的合成

2.5结果与讨论

2.5.1产物鉴定、提纯分析方法

2.5.2目标化合物的表征

2.5.3目标化合物与Aβ42的相互作用

2.6小结

第三章Fc-iAβ5和iAβ5的合成及与Aβ42的相互作用

3.1引言

3.2主要试剂及仪器设备

3.3实验方法

3.3.1薄层色谱法

3.3.2柱色谱法

3.3.3固相多肽合成法

3.3.4反相高效液相色谱法

3.3.5化合物的表征方法

3.3.6样品配制

3.3.7原子力显微镜(AFM)测试

3.3.8ThT荧光光谱测定

3.4目标产物的合成

3.4.1合成路线

3.4.2 Fc-iAβ5(17)的合成

3.4.3iAβ5(19)的合成

3.5结果与讨论

3.5.1产物鉴定、提纯分析方法

3.5.2目标化合物的表征

3.5.3目标化合物对Aβ42作用的研究

3.6小结

第四章总结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间主要的研究成果