褪黑素(Melatonin MT)对大鼠急性脊髓损伤内质网应激蛋白GADD153/CHOP表达的影响

摘要

目的:观察褪黑素(melatonin,MT)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织内质网应激相关蛋白GADD153/CHOP表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用及机制。
　　 方法:以改良Allen’s法制作SD大鼠脊髓损伤动物模型(使用10g金属棒从2.5cm高度打击大鼠T9-10)。96只SD大鼠随机分为三大组:脊髓损伤褪黑素(MT)治疗组及脊髓损伤5％乙醇处理组和生理盐水(NS)处理组,上述每个组又按不同时间点3h、1d、3d、7d各分四个处理组,每组8 R实验大鼠,共十二组；所有实验动物按分组在相应时间点3h、1d、3d、7d处死并获取损伤节段脊髓组织标本,每只实验大鼠处死前以改良Tarlov评分法评价其神经功能,所有脊髓组织标本均以免疫组化法检测CHOP表达及TUNEL方法检测细胞凋亡来评估褪黑素组与乙醇、盐水处理组间的差异。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用IOD(integrated optical densit),累积光密度)及细胞凋亡指数(AI)来表示。
　　 结果:MT组与乙醇处理组、NS处理组不同时间点处死前Tarlov评分依次分别为:3(h)小时Tarlov评分为2.82±0.12和2.68±0.21、2.71±0.17；1(d)天Tarlov评分为2.68±0.06和2.58±0.06、2.52±0.19；3(d)天Tarlov评分为2.60±0.37和2.37±0.11、2.38±0.12；7(d)天Tarlov评分为3.51±0.08和2.85±0.04、2.80±0.10；MT组与乙醇处理组、NS处理组比较,除3h时间点外,其他各个时间点MT组大鼠Tarlov评分明显高于乙醇处理组、NS处理组,且有统计学差异(p＜0.05),以3d时间点后MT组脊髓功能改善更明显。乙醇处理组与NS处理组之间各时间点Tarlov评分比较差异无统计学意义。CHOP在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,MT组与乙醇处理组、NS处理组除3小时时间点CHOP表达差异无统计学意义外,其他各时间点CHOP表达明显低于乙醇、NS组,且有统计学意义(p＜0.05),乙醇处理组与NS处理组之间各时间点CHOP表达差异无统计学意义。MT组内,3h组和1d组、3d组、7d组各组CHOP表达差异均有统计学意义(p＜0.05),且CHOP表达呈现3h＜1d＜3d＞7d之特点。TUNEL方法检测细胞凋亡发现MT组和乙醇处理组、NS处理组3h即出现细胞凋亡,三组均于3d达到凋亡高峰,7d凋亡下降,三组除3h时间点细胞凋亡指数差异无统计学意义外,其他各时间点MT组与乙醇处理组、NS处理组细胞凋亡差异均有统计学意义(P＜0.05),MT组细胞凋亡指数明显低于乙醇处理组、NS处理组,且有统计学意义(P＜0.05),乙醇处理组与NS处理组间细胞凋亡指数比较差异无统计学意义。MT组内各时间点的细胞凋亡差异有统计学意义(p＜0.05),且细胞凋亡指数呈现3h＜1d＜3d＞7d之特点。
　　 结论:
　　 1.本实验运用改良Allen’s法成功制作SD大鼠脊髓损伤动物模型。
　　 2.MT对急性脊髓损伤有保护作用,能改善损伤脊髓的神经功能,这可能与其能够明显抑制CHOP表达及脊髓细胞凋亡有关。
　　 3.MT改善损伤脊髓的神经功能可能与其时效性有关。
　　 4.5％乙醇及NS对急性损伤脊髓的神经功能改善无明显作用。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

前言

第一章 材料与方法

1.1 主要试剂与药品

1.2 主要仪器

1.3 实验动物分组及模型制作

1.4 实验动物的处置及标本制作

1.5 HE染色

1.6 CHOP定量检测--SABC免疫组化染色法

1.7 凋亡细胞计数--TUNEL(缺口原位末端标记法)染色检测法

1.8 图像及数据处理

1.9 统计学处理

第二章 结果

2.1 动物模型的成功性及神经功能缺损情况

2.2 各组大鼠脊髓组织 HE染色炎性病灶数观察

2.3 各组大鼠CHOP的免疫组化结果观察

2.4 各组大鼠细胞凋亡情况

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

附图

综述 脊髓损伤治疗进展

致谢