类风湿关节炎患者CD4+T细胞IL-8基因调控序列DNA甲基化状态研究

摘要

目的:类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫性疾病。其发病机制不明，近年来，DNA甲基化已成为RA的研究热点。在参与RA发病的众多炎症因子中，IL-8的表达异常已逐渐引起研究者的重视，但白细胞介素-8（Intertleukin-8，IL-8）在RA中过度表达的机制目前尚不明确。本研究通过观察RA患者外周血IL-8的表达水平及CD4+T细胞中IL-8基因调控序列甲基化状态，探讨其与IL-8基因表达水平的关系。
　　 方法:收集2009年06月至2010年1月中南大学湘雅医院风湿免疫科门诊RA患者21例，正常对照组15例。(1)检测RA患者血沉及C反应蛋白的水平;并对RA患者进行疾病活动度评估。(2)抽取RA患者及正常对照外周血60ml，密度梯度离心法分离RA患者、正常对照外周血单个核细胞，免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞，提取CD4+T细胞DNA及RNA:①实时定量RT-PCR(real-timeRT-PCR)检测CD4+T细胞中IL-8的mRNA表达水平;②酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血清中IL-8的蛋白水平;③亚硫酸氢钠测序法检测CD4+T淋巴细胞中IL-8基因调控区域的甲基化状态。
　　 结果:①RA患者CD4+T细胞中IL-8 mRNA表达水平较正常对照明显升高（P＝0.028）;②ELISA结果显示RA患者血清中IL-8的蛋白水平较正常对照明显增加(P＜0.01)，且与CRP浓度呈正相关(P=0.016)，其中疾病活动组较非活动组外周血清IL-8蛋白水平明显增高（P＜0.05）;③亚硫酸氢钠测序结果表明RA患者CD4+T细胞中IL-8基因调控区域的甲基化水平显著降低(P＝0.038)，有3个连续位点低甲基化有统计学意义（P值分别为0.014，0.021，0.013），并与IL-8的mRNA表达呈显著负相关(P=0.024)。
　　 结论:(1)RA患者外周血CD4+T细胞中IL-8的mRNA表达量高于正常对照;(2) RA组外周血IL-8蛋白表达明显高于正常对照;(3) RA患者CD4+T细胞中IL-8启动子存在低甲基化，与IL-8过表达密切相关。

目录

声明

摘要

缩略语表

前言

第一章 材料与方法

1．1 材料

1．2 主要材料与试剂

1．3 试验方法

1．3 统计学方法

第二章 结果

2．1 RA患者(n=21)及正常对照组(n=15)外周血CD+4T细胞IL-8mRNA的表达水平

2．2 RA患者及正常对照组外周血血清中IL-8的蛋白表达水平

2．3 RA患者及正常对照组外周血CD+4T细胞IL-8基因调控序列甲基化水平

第三章 讨论

第四章 结论

参考文献

综述

致谢