polyI:C诱导负载HPV E744-62多肽的人脐血Cs抗宫颈癌免疫效应研究

摘要

PoIyI∶C诱导负载HPVE744-62多肽脐血DCs体外抗宫颈癌的免疫效应研究
　　 目的:观察PolyI:C诱导负载HPVE744-62多肽的人脐血DCs体外抗宫颈癌的免疫效应。
　　 方法:采集健康足月妊娠孕妇的脐带血，密度梯度离心法分离获得脐血单个核细胞，取贴壁细胞体外经rhGM-CSF、rhIL-4诱导培养7天获DCs。分别用PolyI:C、HPV16E744-62多肽、PolyI:C联合HPV16E744-62多肽来刺激DCs，设未经抗原负载的DCs作为对照组。观察细胞形态，收集培养9天的各组DCs，采用流式细胞仪检测DCs相关表型:CD1α、HLA-DR、CD40和CD83;ELISA法检测DCs上清中IL-12、IL-10的含量，混合淋巴细胞反应测定各组DCs体外刺激T细胞增殖的能力，ELISA法检测T细胞培养上清液中的IFN-γ含量，MTT法检测CTL对宫颈癌细胞系CaSki和肝癌细胞系HepG2的杀伤效应。
　　 结果:各组DCs均可诱导分化为一定数量的具有典型形态和表型的DCs。以HPV16E744-62多肽联合PolyI:C组最高。与未经抗原负载的DCs相比，其他各组抗原刺激的DCs数量、表型CD1α、HLA-DR、CD40和CD83表达率、分泌IL-12的能力、刺激同种异体T细胞增殖能力、分泌IFN-γ水平及激活的CTL对CaSki细胞杀伤力均较高，尤其是以HPV16E744-62多肽联合PolyI:C组效果最明显，同时其分泌IL-10水平亦最低。而此类CTL对HepG2细胞无特异性杀伤效应。
　　 结论:负载HPV16E744-62多肽的脐血DCs体外可诱导特异性杀伤宫颈癌细胞的免疫效应，PolyI:C作为免疫佐剂可增强抗肿瘤免疫反应。

目录

声明

摘要

缩略词

前言

第一章 Poly I：C诱导负载HPV E744-62多肽脐血DCs在体外的抗宫颈癌免疫效应研究

1．材料与方法

1．1 主要试剂

1．2 主要实验仪器和耗材

1．3 肿瘤细胞系

1．4 DCs体外诱导

1．5 DCs计数

1．6 DCs表型测定

1．7 DCs荧光染色

1．8 DOs培养上清中IL-10、IL-12浓度检测

1．9 T细胞的制备

1．10 DCs刺激T细胞增殖能力检测

1．11 T细胞培养上清中IFN-γ浓度检测

1．12 CTL杀伤活性检测

1．13 统计学方法

2．结果

2．1 脐血DCs培养过程中的形态学变化情况

2．2 DCs细胞表型分析结果

2．3 DCs培养上清液中IL-10和IL-12的检测结果

2．4 DCs刺激T细胞增殖能力检测结果

2．5 T细胞培养上清中IFN-γ浓度检测结果

2．6 CTL杀伤活性检测结果

3．讨论

3．1 体外诱导脐血来源DCs的意义

3．2 DCs负载HPV E7多肽的意义

3．3 Poly I：C作为免疫佐剂的意义

第二章 Poly I：C诱导负载HPV E744-62多肽脐血DCs在体内的抗宫颈癌免疫效应研究

1．材料与方法

1．1 实验动物

1．2 肿瘤细胞系

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器和耗材

1．5 裸鼠人T细胞免疫重建

1．6 裸鼠荷瘤

1．7 观察记录裸鼠的生存状况和肿瘤的生长情况

1．8 DCs疫苗的制备

1．9 动物分组及接种疫苗

1．10 人IFN-γ浓度检测

1．11 人源性CD3+、CD4+、CD8+细胞测定

1．12 计算抑瘤率

1．13 裸鼠生存期观察

1．14 统计学分析

2．结果

2．1 裸鼠荷瘤情况

2．2 移植瘤情况

2．3 裸鼠血中人IFN-γ浓度检测结果

2．4 裸鼠血中人源性CD3+、CD4+、CD8+T细胞测定

2．5 裸鼠生存期观察结果

3．讨论

3．1 裸鼠免疫重建及作宫颈癌动物模型的意义

3．2 DCs对荷宫颈癌裸鼠的免疫治疗效果

结论

参考文献

综述

致谢

攻读学位期间公开发表的学术论文及科研课题等