酰基化Ghrelin在体外拮抗巨噬细胞介导的炎症反应对胰岛β细胞功能的影响

摘要

目的:探讨酰基化Ghrelin能否保护胰岛β细胞免遭巨噬细胞介导的炎症损伤。
　　方法:采用Transwell小室构建小鼠胰岛细胞株MIN6和巨噬细胞株RAW264.7的共培养系统。共培养前4h，在RAW264.7巨噬细胞中分别加入酰基化ghrelin（10、100、500nmol/L）。共培养48h后，用实时定量PCR和Westernblotting检测RAW264.7巨噬细胞上TLR4和脂肪酸结合蛋白(A-FABP)的表达，用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(IL-1)β和肿瘤坏死因子（TNF）-α的浓度，此外，分别用含葡萄糖3mmol/L、30mmol/L的KRBH液孵育MIN6胰岛细胞1h，用ELISA测定细胞上清液中胰岛素的浓度。
　　结果:(1)与巨噬细胞对照组比较，共培养后，巨噬细胞TLR4和A-FABP的表达水平以及细胞上清液中IL-1β和TNF-α的浓度都显著增高(P＜0.05);(2)与胰岛β细胞对照组比较，共培养后，高糖刺激的胰岛素分泌水平降低(P＜0.05);与共培养对照组比较，酰基化ghrelin干预后再进行共培养，巨噬细胞TLR4和A-FABP的表达水平以及细胞上清液中的IL-1β和TNF-α的浓度都显著降低(P＜0.05)，而且呈剂量依赖性。
　　结论:(1)巨噬细胞与胰岛β细胞共培养后，可活化炎症通路，释放炎症因子，损伤胰岛β细胞的胰岛素分泌功能;(2)酰基化ghrelin可剂量依赖性削弱巨噬细胞和胰岛β细胞共培养后炎症通路的活化和炎症因子的释放，但不能完全阻止胰岛β细胞胰岛素分泌功能的降低。

目录

声明

摘要

英文缩写一览表

第一章 前言

第二章 材料与方法

1．1 实验材料

1．1．1 细胞株

1．1．2 实验仪器

1．1．3 主要试剂与耗材

1．1．4 主要试剂配制

2．1 实验方法

2．1．1 实验分组

2．1．2 细胞培养及收集

2．1．3 RNA提取

2．1．4 引物设计及合成

2．1．5 逆转录PCR

2．1．6 荧光实时定量PCR(RT-PCR)

2．1．7 蛋白提取

2．1．8 蛋白定量

2．1．9 Western印迹法(Western Blotting)

2．1．10 酶联免疫吸附(ELISA)法

3．统计学分析

第三章 结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述 Ghrelin对免疫系统的调控作用

攻读学位期间主要的研究成果

致谢