二甲双胍对实验性大鼠肝癌发生的影响及其VEGF、P53表达的变化

摘要

目的:观察二甲双胍对二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine，DEN)和微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR， MC-LR)诱导的大鼠肝癌发生的影响，检测其VEGF、P53水平，通过VEGF、P53表达的变化探讨二甲双胍在肝癌的可能的抗肿瘤作用机制。
　　方法:将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、造模组及二甲双胍组。造模组及二甲双胍组用二乙基亚硝胺和微囊藻毒素-LR建立大鼠肝癌模型:每5天腹腔注射0.25％DEN溶液(10mg/kg)+藻毒素MC-LR(20ug/kg)1次，连续16周，诱癌4周为肝细胞损伤期，8周至12周时为肝细胞增生-硬化期，16周时为肝细胞癌变期;对照组注射等量生理盐水。三组均喂养标准大鼠饲料，二甲双胍组在此基础上将二甲双胍溶于蒸馏水后灌胃(250mg/Kg·d)。三组均于12、16周时随机选取10只处死。大鼠处死后精确称肝重，记录肝表面癌结节数，计算肝指数（即肝重/体重比）。取肝组织行病理组织学检查，免疫组化检测VEGF、P53蛋白水平，荧光定量PCR(FQ-PCR)检测VEGFmRNA水平。
　　结果:
　　1.对照组大鼠状况良好，无异常死亡;DEN+MC-LR造模组12周出现肝硬化，16周出现肝癌;二甲双胍组病变类似于造模组，但病变程度较同时期造模组轻。
　　2.二甲双胍对DEN+MC-LR诱发肝癌大鼠肝指数、肝表面癌结节数的影响（16周）:造模组大鼠肝指数、肝结节个数均较正常组大鼠高(P＜0.05)，二甲双胍组低于造模组(P＜0.05)，但仍高于对照组。
　　3.二甲双胍对DEN+MC-LR诱发肝癌大鼠VEGF、P53的影响:免疫组化显示造模组肝组织VEGF、P53蛋白水平较对照组明显升高(P＜0.05)，二甲双胍组低于造模组(P＜0.05)。FQ-PCR显示造模组肝组织VEGFmRNA较对照组明显升高(P＜0.05)，二甲双胍组低于造模组(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.DEN+MC-LR是可行的大鼠肝癌诱发方式。
　　2.二甲双胍对DEN+MC-LR诱发的大鼠肝癌具有一定的抑制和延缓作用。
　　3.DEN+MC-LR诱发的大鼠肝癌发生过程中肝组织VEGF表达及P53蛋白水平明显升高，二甲双胍干预对两者均有抑制作用，推测二甲双胍可能通过抑制VEGF的表达、下调P53蛋白水平发挥在肝癌的抗肿瘤作用。